網膜グリア細胞の形質制御による糖尿病網膜症の予防と治療法の基礎研究

控制视网膜胶质细胞特性防治糖尿病视网膜病变的基础研究

• 批准号: 14657448
• 负责人: 澤田 典均
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657448/
• 关键词: 血液脳関門; 血液網膜関門; タイト結合; MAPK; PKA; 糖尿病網膜症; グリア細胞; 血管透過性; VEGF; GDNF; AGE

血液網膜関門(BRB)や血液脳関門(BBB)の本体は、血管内皮細胞のタイト結合である。そこでこれらの細胞のタイト結合に発現しているclaudin-1とclaudin-5に着目して、テトラサイクリン依存性転写因子(tet-on system)を導入した血管内皮細胞株(RLE)を用いて、claudin-1とclaudin-5の発現調節によるタイト結合機能制御機構を検討した。1.野生型またはMAPキナーゼ(MAPK)の標的部位と想定されるThr203をAlaに置換したclaudin-1遺伝子を導入し、それらの発現を随時誘導できるRLE細胞株を樹立した。この血管内皮細胞にclaudin-1の発現を誘導すると、野生型、変異型claudinの両者とも、機能的なタイト結合を再構成した。さらにThr203をAlaに置換したclaudin-1を発現誘導しMAPK阻害剤を作用させた実験から、MAPKがclaudin-1タンパクを標的分子としてタイト結合のバリア機能を増強すること、claudin-1配列内のThr^<203>がTriton-X100非可溶性claudin-1の量やタイト結合のバリア機能に関与していることが明らかになった。2.野生型またはPKAの標的部位と想定されるThr207をAlaに置換したclaudin-5遺伝子を導入し、それらの発現を随時誘導できるRLE細胞株を樹立した。この細胞株にこれらのclaudin-5を発現させて解析したところ、野生型、変異型claudinの両者とも内皮細胞のタイト結合を再構成すること、claudin-5のThr207がPKAによるリン酸化部位であること、そのリン酸化が内皮細胞のバリア機能の制御に重要な役割を果たすことが明らかになった。

The blood membrane (BRB) and the blood membrane (BBB) are the main components of the blood vessel endothelial cells. The expression of claudin-1 and claudin-5 in vascular endothelial cell line (RLE) is regulated by the introduction of a tet-on system. 1. The wild-type MAPK target site was identified by Thr203 and claudin-1 gene was introduced into RLE cell lines, and the expression of MAPK was induced at any time. The expression of claudin-1 in vascular endothelial cells was induced, wild-type, heterotypic claudin, and functional claudin recombination. In addition, Thr203 Ala substitution induced the expression of claudin-1, MAPK inhibitor, MAPK inhibitor, claudin-1 inhibitor, and claudin-<203>1 inhibitor. 2. The wild-type PKA target site was identified by Thr207 and claudin-5 gene was introduced and induced at any time. The expression of claudin-5 in these cell lines was analyzed by PCR, and the expression of claudin-5 and Thr207 in PKA was analyzed by PCR, and the expression of claudin-5 was analyzed by PCR.

项目成果

Kamimura Y et al.: "Barrier function of microvessels and roles of glial cell line-derived neurotrophic factor in the rat testis"Med Electron Microsc.. 35・3. 139-145 (2002)

Kamimura Y等：“大鼠睾丸中微血管的屏障功能和神经胶质细胞系来源的神经营养因子的作用”Med Electron Microsc. 35・3（2002）。

Osanai M et al.: "Hepatocyte Nuclear Factor (HNF)-4α induces expression of endothelial Fas ligand (FasL) to prevent cancer cell transmigration : A novel defense mechanism of encothelium against cancer metastasis"Jpn J Cancer Res.. 93・5. 532-541 (2002)

Osanai M等人：“肝细胞核因子（HNF）-4α诱导内皮Fas配体（FasL）表达以防止癌细胞迁移：内皮细胞对抗癌症转移的新型防御机制”Jpn J Cancer Res.. 93・5。 532-541 (2002)

Tobioka H et al.: "Polarised distribution of carcinoembryonic antigen is associated with a tight junction in human colorectal adenocarcinomas"J Pathol.. 198・2. 207-212 (2002)

Tobioka H等：“癌胚抗原的极化分布与人结肠直肠腺癌中的紧密连接有关”J Pathol.. 198・2（2002）。

澤田典均: "病気と細胞内小器官"森道夫編著・文光堂. 236 (2002)

Noriyoshi Sawada：“疾病和细胞内细胞器”，Michio Mori 编辑，Bunkodo 236 (2002)。

澤田典均 他: ""すきま"の細胞生物学細胞間接着装置タイト結合とヒト疾患"札幌医学雑誌. 72. 1-7 (2003)

Norihito Sawada 等：“间隙的细胞生物学、细胞间粘附装置、紧密连接和人类疾病”札幌医学杂志 72. 1-7 (2003)。