レチナ-ルタンパク質のin vitroとin vivoのフォールディングの比較

视网膜蛋白体外和体内折叠的比较

• 批准号: 09261214
• 负责人: 杉山 康雄
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09261214/
• 关键词: レチナ-ルタンパク質; SDS変性; クロモホア再生; in vitroフォールディング; 分裂酵母; in vivoフォールディング

bR類(天然状態で大量発現;安定)とhR類(天然状態で少量発現;不安定)をモデルとして、膜タンパク質のin vitroとin vivoでの構造形成機構を比較解析した。SDSで変性させたバクテリオオプシン(bO)類の7本のヘリックスは適切な脂質環境では“自発的に"フォールディングする。一方、SDSで変性したハロオプシン(hO)は全くクロモホアを再生しなかった。bR類と異なり、hR類は菌から単離すると不安定で自然に変性し、低濃度のSDSはこの変性過程を促進した。従って、hR類はbR類と比べ膜外ループ領域の熱的なゆらぎが大きく、hOのヘリックスは“自発的に"フォールディングできないと思われた。今後、bO類とhO類のin vitroでのクロモホア再生の相違がアミノ酸配列のどのような違いによるのかを決める必要がある。in vitroで再生できないhOは異種細胞(分裂酵母)では膜に組み込まれ正常にフォールディングし、その発現量はbO類のそれとほぼ同じであった。また、細胞内発現場所はオルガネラ(ER、ゴルジ、液胞)膜であることが間接蛍光抗体法によって分かった。分裂酵母の膜画分から部分精製したレチナ-ルタンパク質は光化学反応を示したので、今後、オルガネラ膜のエネルギー変換に及ぼす光の影響を検討する予定である。レチナ-ルタンパク質のin vitro再生とin vivoでの構造形成の相違は膜タンパク質のpost-translationalとco-translationalフォールディング過程の相違に対応すると思われる。レチナ-ルタンパク質で得られた知見は、今後、少量しか存在しなかったり不安定な膜タンパク質を大量に発現させる方法、それらを天然状態のまま大量に調製する方法、あるいは、変性状態から天然状態へ再生させる方法を開発していく指針を与えるであろう。

BR (a large number of natural conditions are found; stable). HR (natural conditions are found in a small amount; instability). In this paper, the formation mechanism of in vitro in vivo is analyzed. The SDS information management information system (bO) category 7 is related to the environmental protection of fat and fat. On the one hand, SDS has a sexual response. (hO) the whole body is in a state of rebirth. The bR category, the hR type, the bacteria, the unstable, the natural, the low-grade, the SDS, the low-grade, the negative, the unstable, the natural, the low, the negative, the negative. The bR category of the hR category is higher than that of the extracellular domain, and that of the hO is higher than that of the external domain. From now on, the bO type hO will be regenerated, and the acid configuration will determine if it is necessary. In vitro regenerated hO cells (Schizosaccharomyces cerevisiae), the normal cell cycle, the normal cell cycle, the The membrane of ER, cytosol and liquids was separated by photoantibody method. The membrane painting of split yeast is divided into two parts. In the future, the membrane is divided into two parts, the membrane is divided into two parts, the membrane is divided into two parts: the membrane, the membrane, the This is the first time that the in vitro has been regenerated and in vivo has been fabricated to form a phase-sensitive film. This is the result of a series of experiments. The process is different from each other in the process of post-translational co-translational. In the future, there are a large number of monitoring methods, such as a large number of methods, a large number of methods.

项目成果

Yasuo Sugiyama: "An insertion or deletion in the extramembrane loop connecting helices E and F of archaerhodopsin-1 affects in vitro refolding and slows the photocycle." Photochem.Photobiol.66(4). 541-546 (1997)

Yasuo Sugiyama：“连接 archaerhodopsin-1 螺旋 E 和 F 的膜外环中的插入或缺失会影响体外重折叠并减慢光周期。”