白血病細胞の分化と病型に特徴的なユビキチン化蛋白質の解析

白血病细胞分化和疾病类型特征的泛素化蛋白分析

• 批准号: 09267235
• 负责人: 高田 耕司
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09267235/
• 关键词: ユビキチン; マルチユビキチン鎖; プロテアソーム; 白血病細胞; K562細胞; 分化; AML

本年度の成果は以下の3点である。1.マルチユビキチン化蛋白質の生成速度の解析白血病細胞の分化が細胞内蛋白質のユビキチン化に与える影響を解析するため、対数増殖期および酪酸等で分化したK562細胞におけるマルチユビキチン鎖生成速度を求めた。その際、プロテアソーム阻害剤でマルチユビキチン化蛋白質の分解を抑え、その濃度の経時的変化を特異的ELISAで追跡した。結果、分化に伴い『細胞質の水溶性蛋白質』に対する同速度は有意に増加し、『細胞質と核の難溶性蛋白質』に対する同速度は激減した。また、対数増殖期の場合、後者の速度は熱ショックによって増加するが、分化に伴いこの性質も消失した。以上の結果から、ユビキチン化される主要な蛋白質群が分化と共に大きく変わると推定される。今後、分化や増殖に特徴的なマルチユビキチン化蛋白質を精製し、標的蛋白質を同定することで、その生物学的意義を明確にする。2.マルチユビキチン化蛋白質の精製の検討結合型ユビキチンに特異的なモノクローナル抗体FK2をアガロースゲルに導入しアフィニティーカラムを作成した。K562細胞抽出液(>10mg protein)のマルチユビキチン化蛋白質は、同カラム(1ml)にほぼ完全に吸着し、大半の夾雑蛋白質から分離された。また、これを3.5 M MgCl_2で溶出した画分には、常に元の40-50%のマルチユビキチン鎖が回収された。今後、精製標品から標的蛋白質を含む断片を得るための条件設定を進める。3.OCI/AML la細胞のユビキチン抗体陽性蛋白質急性骨髄性白血病の患者細胞とOCI/AML-la細胞の核分画から、9kDaと13kDaのユビキチン抗体陽性蛋白質を見出した。他の株化白血病細胞(HL-60、K562等)における両蛋白質の量は極めて少なかった。大量のOCI/AML-la細胞から抽出・精製を進める計画である。

The results of this year are as follows: 1. Analysis of the rate of protein production in leukemia cells and the effect of protein production in leukemia cells on differentiation and differentiation in K562 cells. In addition, the protein decomposition inhibition, concentration and time-specific ELISA tracking can be used for the detection of protein. As a result, the same rate of differentiation with cytoplasmic and water-soluble proteins increased intentionally, while the same rate of differentiation with cytoplasmic and hard-soluble proteins decreased significantly. In the case of the growth period, the speed of the latter increases, and the characteristics of the latter disappear. The above results show that the main protein groups are differentiated and estimated. In the future, the biological significance of differentiation and growth characteristics of protein purification and target protein identification shall be clarified. 2. Purification of protein by binding to specific antibody FK2 K562 cell extract (>10mg protein) was completely adsorbed and most of the protein was separated from the extract (1ml). 3.5 M MgCl_2 was dissolved in 40-50% of the solution. In the future, the refined standard protein content will be improved. 3. Antibody-positive proteins in OCI/AML-la cells and in OCI/AML-la cells from patients with acute osteoblastic leukemia. Other leukemia cells (HL-60, K562, etc.) contain extremely low levels of protein. A large number of OCI/AML-la cells were extracted and refined.

项目成果

Takada,K.: "Serum concentrations of free ubiquitin and multiubiquitin chains." Clin.Chem.43. 1188-1195 (1997)

Takada,K.：“游离泛素和多泛素链的血清浓度。”

Joh,K.: "Isolation and characterization of tubular basement membrane antigen common to humans and rats." Int.J.Mol.Med.1. 223-226 (1998)

Joh,K.：“人类和大鼠常见的管状基底膜抗原的分离和表征。”

栗村 正之.: "ヒト全脳虚血における髄液ユビキチンの上昇について-虚血性脳症の神経学的予後推定のために-" 臨床神経学. 37. 963-968 (1997)

Masayuki Kurimura.：“人类全脑缺血中脑脊液泛素的增加 - 用于估计缺血性脑病的神经学预后”《临床神经病学》37. 963-968 (1997)。