Pathologic analysis of age-related diseases based on individual quantification of polyubiquitin chain forms

基于多聚泛素链形式个体定量的年龄相关疾病的病理分析

• 批准号: 19K07899
• 负责人: 高田 耕司
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K07899/
• 关键词: ユビキチン; ポリユビキチン鎖; プロテオスタシス; 老化; 細胞老化; 正常二倍体細胞; 加齢性疾患; プロテアソーム; オートファジー

ユビキチン－プロテアソーム系やオートファジー系が担う不要なタンパク質の合目的分解は、真核生物の細胞内タンパク質の恒常性（プロテオスタシス）の維持に不可欠である。近年、老化に伴って、両分解系の機能が低下し、加齢性疾患の発症リスクとなる可能性が多数報告されている。そこで本研究では、両系の分解シグナルであるポリユビキチン鎖に着目し、プロテオスタシスに基づく老化マーカーとしての意義を検討する。ポリユビキチン鎖を認識するFK2抗体を固相と検出に用いたFK2-FK2 sandwich ELISAは、3種類（K48鎖，K64鎖，M1鎖）の各ポリユビキチン長鎖を区別なく検出し、測定値は全鎖総量に対応することが明確となった。各鎖型に特異的な測定系を確立するため、市販の各鎖（K48鎖，K64鎖，M1鎖）特異抗体を検出に用いた様々なFK2-各抗体 sandwich ELISAを検証したが、どの組み合わせも実用レベルの感度や特異性を示さなかった。ヒト正常二倍体線維芽細胞TIG-1を用いた検討では、細胞集団倍加数（PDL）62を超えると同細胞の倍加速度が遅延し、その後、肥大扁平化やSA-β-galの発現などの複製老化の特徴を示したため、PDL 24～34群、43～56群、62～72群の細胞から、1% Triton X-100可溶化画分とその不溶成分を2% SDSで可溶化した画分を調製し、分画ごとに各群のポリユビキチン鎖量を比較した。しかし、予想に反して、各平均値に有意差はなく、細胞老化の影響を見出せなかった。TIG-1細胞の老化とプロテアソーム活性の関係についても同様の結果を得ているが、実験手法の見直しなどの再検証を予定している。

The system is responsible for the decomposition of eukaryotes and the maintenance of intracellular constancy in eukaryotes. In recent years, most of the reports on the possibility of aging with diabetes, low mechanism of decomposing system, and the possibility of disease in patients with sexual diseases. The purpose of this study is to analyze the meaning of aging in this study. in this study, the meaning of this study is to analyze the meaning of aging. This is very important for the detection of FK2 antibodies. In the solid phase test, the data of FK2-FK2 sandwich ELISA, K64, M1) are measured, and the full range of data are measured. The specific antibodies of each type of virus (K48, K64, M1) were determined by the specific antibodies of each type (K48, K64, M1). The specific antibodies of each type of antibody (FK2) were detected by FK2, and the sensitivity of each antibody was detected by the sensitivity test. The TIG-1 of normal diploid line maintenance germ cells is extended with the double addition of cell set (PDL) 62 and the doubling rate of hypertrophy and flattening of SA- β-gal cells. The replication and aging of normal diploid cell line maintenance germ cell PDL 2434, 43,56,6272 cell cycle are shown in this paper. 1% Triton Xmuri 100 soluble paintings are divided into four parts: insoluble components, SDS, insoluble components, insoluble components, insoluble components You know, you don't want to, you don't want to know, you don't want to, and you don't want to. The results of TIG-1 cell aging test showed that there was no significant difference between the two groups. The results showed that the results were the same as those of the control group.

项目成果

動物細胞におけるポリユビキチン鎖量の変動と基準値

动物细胞中多聚泛素链含量的变化及参考价值

• 发表时间: 2022
• 作者: Osada K;Miyazono S;Noguchi T;Kashiwayanagi M;小針佑介，平河多恵，加藤尚志，髙田耕司
• 通讯作者: 小針佑介，平河多恵，加藤尚志，髙田耕司

線維芽細胞の老化とポリユビキチン鎖の量との関係について．

关于成纤维细胞衰老与多聚泛素链数量的关系。

• 发表时间: 2022
• 作者: Sato K;Yoshizawa H;Seki T;Shirai R;Yamashita T;Okano T;Shibata K;Wakamatsu MJ;Mori Y;Morita T;Matsuyama TA;Ishibashi-Ueda H;Hirano T;Watanabe T.;小針佑介，平河多恵，加藤尚志，高田耕司
• 通讯作者: 小針佑介，平河多恵，加藤尚志，高田耕司

ポリユビキチン量を指標とした化学物質の細胞毒性評価

以多聚泛素含量为指标评价化学物质的细胞毒性

• 发表时间: 2019
• 作者: 高田耕司;天沼諒太，加藤尚志，平河多恵
• 通讯作者: 天沼諒太，加藤尚志，平河多恵

ポリユビキチン鎖量に基づく脊椎動物細胞のプロテオスタシス評価系の検討．

基于多聚泛素链数量的脊椎动物细胞蛋白质稳态评估系统的检查。

• 发表时间: 2022
• 作者: Watanabe T;Sato K.;小針佑介，平河多恵，加藤尚志，高田耕司
• 通讯作者: 小針佑介，平河多恵，加藤尚志，高田耕司

SETD8阻害によるHaCaT細胞の細胞老化様現象の解析

SETD8 抑制分析 HaCaT 细胞中的细胞衰老样现象

• 发表时间: 2020
• 作者: 清水秀将;平河多恵，松浦知和，高田耕司
• 通讯作者: 平河多恵，松浦知和，高田耕司