真核生物染色体DNAの複製開始・伸長のMcm10タンパク質によるモニター機構

Mcm10蛋白监测真核染色体DNA复制起始和延伸的机制

• 批准号: 11241202
• 负责人: 川崎 泰生
• 金额: $ 20.16万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11241202/
• 关键词: DNA複製; 細胞周期; 出芽酵母; チェックポイント; Cdc7; Dbf4; Mcm10; 複製フォーク; 複製開始; 合成致死; Dna2

真核生物共通の染色体複製のメカニズムと複製開始・伸長のモニター機構を解明するために出芽酵母をモデル系として、染色体DNAの複製に必要である幾つかの因子について遺伝学的、生化学的、および細胞生物学的なアプローチを行ってきた。Mcm10は核内に局在してORC(Origin Recognition Complex)と共局在し、G1期においてはMcm7の局在とも一致するので核内の複製開始場所をつかさどってことが示唆された。mcm10変異との合成致死変異を分離することにより遺伝学にMcm10と相互作用する因子をスクリーニングしたところ、6種類の相補群に分けられる変異を分離することができた。そのうち、複製開始に関与する因子の変異が分離され、これはMcm10が複製開始に関与することを積極的に支持した。Mcm10は複製フォークの機能に積極的に関与し、Mcm10の欠損がS期の進行全体に影響を及ぼす可能性が示唆された。得られた新規の遺伝子SLM2、SLM6については、mcm10変異株では複製フォークの進行がゲノム上の至る所で妨げられ、異常な複製中間体が蓄積することを考えあわせると、Slm2/Slm6はこの様な複製異常を認識、修復している可能性がある。一方、出芽酵母のタンパク質抽出液を用いた試験管内複製開始複合体形成系を導入・改良し、複製開始に必須な役割を持つCdc7/Dbf4タンパク質リン酸化酵素の複製開始複合体への結合を解析した。今までのところ、S期に入ってからCdc7/Dbf4複製開始複合体へ結合し、その結合はS期チェックポイントの制御下に置かれていることを示唆する結果が得られている。

Eukaryotes の common chromosome copy の メ カ ニ ズ ム と duplicate, elongation の モ ニ タ ー institutions を interpret す る た め に budding yeast を モ デ ル department と し の て, chromosome DNA replication に necessary で あ る several つ か の factor に つ い て heritage 伝, biochemistry, お よ び cell biology な ア プ ロ ー チ を line っ て き た. Mcm10 は nuclear に bureau in し て ORC (Origin Recognition Complex) と total bureau in し, G1 phase に お い て は Mcm7 の bureau in と も consistent す る の で の duplicate within the nuclear sites を つ か さ ど っ て こ と が in stopping さ れ た. McM10 - different と の synthetic lethal - different を separation す る こ と に よ り heritage 伝 learn に McM10 と interaction す る factor を ス ク リ ー ニ ン グ し た と こ ろ に points, 6 species の phase group け ら れ る - different を separation す る こ と が で き た. そ の う ち, duplicate に masato and す る factor の - different が separation さ れ, こ れ は Mcm10 が duplicate に masato and す る こ と を positive に support し た. Mcm10 は copy フ ォ ー ク の function に positive に masato and し and Mcm10 の owe loss が S period の を all に impact and ぼ が す possibility in stopping さ れ た. Have ら れ た new rules の heritage 伝 SLM2, SLM6 に つ い て は and McM10 - different strains で は copy フ ォ ー ク の for が ゲ ノ ム on の to る で hinder げ ら れ, abnormal な replication intermediates が accumulation す る こ と を exam え あ わ せ る と, SLM2 / SLM6 は こ の others な duplication を cognition, repair し て い る possibility が あ る. Side, budding yeast の タ ン パ ク qualitative extract を with い た duplicate complex formation test tube department を import, improved し, duplicate に must cut を な service つ Cdc7 / Dbf4 タ ン パ ク qualitative リ ン の duplicate acidification enzyme complex へ の combining analytical し を た. Today ま で の と こ ろ, S phase に into っ て か ら Cdc7 / Dbf4 duplicate complex へ し, そ の combining は S period チ ェ ッ ク ポ イ ン ト の under the system of imperial に buy か れ て い る こ と を in stopping す る results ら が れ て い る.

项目成果

Tomoko Ohya: "Structure and function of the fourth subunit (Dpb4p) of DNA polymeraseε in Saccharomyces cerevisiae."Nucleic Acids Research. 28・20. 3846-3852 (2000)

Tomoko Ohya：“酿酒酵母 DNA 聚合酶ε的第四亚基（Dpb4p）的结构和功能。核酸研究”28・20（2000）。

Lisa Homesley: "Mcm10 and the MCM2-7 complex interact to initiate DNA synthesis and to release replication factors from origins."Genes and Development. 14・8. 913-926 (2000)

Lisa Homesley：“Mcm10 和 MCM2-7 复合物相互作用，启动 DNA 合成并从起点释放复制因子。”14・8 (2000)。

Araki, Kawasaki, et al.: "Budding yeast mcm10/dna43 mutant requires a novel repair pathway for viability."Genes to Cells. 8-5. 465-480 (2003)

Araki、Kawasaki 等人：“出芽酵母 mcm10/dna43 突变体需要一种新的修复途径来维持活力。”基因到细胞。

Makoto Kihara: "Characterization of the yeast Cdc7p/Dbf4p complex purified from insect cells : its protein kinase activity is regulated by Rad53p."Journal of Biological Chemistry. 275・45. 35051-35062 (2000)

Makoto Kihara：“从昆虫细胞中纯化的酵母 Cdc7p/Dbf4p 复合物的表征：其蛋白激酶活性受 Rad53p 调节。”生物化学杂志 275・45（2000）。

Yasuo Kawasaki, Akio Sugino: "Yeast replicative DNA polymerases and their role at the replication fork"Molecules and Cells. 12. 277-285 (2001)

Yasuo Kawasaki、Akio Sugino：“酵母复制 DNA 聚合酶及其在复制叉中的作用”分子和细胞。