細胞表層・細胞膜を介した環境との相互作用ネットワークの解析

通过细胞表面层/细胞膜与环境的相互作用网络分析

• 批准号: 12206005
• 负责人: 関口 順一
• 金额: $ 28.16万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12206005/
• 关键词: 枯草菌; 細胞膜; 細胞壁; 多剤耐性; 分泌; 2次元電気泳動; ゲノム; GFP蛋白; 表層蛋白; 相互ネットワーク; 膜蛋白; 細胞壁結合蛋白; GFP融合蛋白; MDR遺伝子; センサー機能

枯草菌細胞表層蛋白質の局在部位観察法を確立し、6種類の蛋白について観察した。その結果、2つの細胞壁溶解酵素(CwlE, CwlF)及びプロテアーゼWprA、機能未知蛋白YqgAが分裂面に局在し、2つの細胞壁溶解酵素(CwlB, CwlG)は細胞表層にほぼ均一に分布することが解った。またYvrGH二成分制御系が細胞表層蛋白であるWapA, WprAの発現を正に、LytABCを負に制御していること、並びにYvrG蛋白がwprA及びlytAのプロモーター領域に特異的に結合することを確認した。さらにSigDに関するアレー解析により、新たに2個のオペロンと、7個の遺伝子がSigD依存であることを明らかにした。枯草菌膜タンパク質プロテオームをMALDI-TOF MSおよびMS/MSを用いて解析するために、高効率、ハイスループットな方法として、PVDF膜を利用した方法を開発した。枯草菌細胞膜からステップワイズにタンパク質を抽出し、一次元および二次元の電気泳動で展開し、約630種類のタンパク質を同定した、80%のタンパク質が膜貫通ドメインまたは膜にアンカーできる配列を持っていたが、20%はSecAのように水溶性と判定れるタンパク質であることを明らかにした。ABCファミリーに属する薬剤排出タンパク質の基質特異性を決定するため,約50種の薬剤についてスクリーニングを行った結果,ファミリー7に属するYtsCDがバシトラシン特異的トランスポーターであること又その上流に存在する二成分制御系のセンサーキナーゼYtsBが培地中のバシトラシンをシグナルとして受け取りレスポンスレギュレーターYtsAを活性化しYtsCDオペロンの発現を正に制御していることを見出した。またABCトランスポーターのファミリー3に属するExpZがvirginiamaycin Mの特異的トランスポーターであることを明らかにした。

A method for detecting the position of surface proteins in Bacillus subtilis cells was established. Six kinds of proteins were detected. 2. Cell wall lysozymes (CwlE, CwlF) and protein YqgA with unknown function are distributed in the cleavage plane, 2. Cell wall lysozymes (CwlB, CwlG) are distributed uniformly in the cell surface. YvrGH two-component control system is confirmed to be a domain specific binding between WapA, WprA and LytABC. 2 new entries, 7 new entries, 1 new entry A new method for the analysis and utilization of PVDF membrane was developed by MALDI-TOF MS and MS/MS The tannin substance is extracted from the cell membrane of Bacillus subtilis, and the primary and secondary electrical swimming is carried out. About 630 types of tannin substances are equal. 80% of the tannin substance is arranged in a membrane-penetrating manner and opposite to the membrane, and 20% of the tannin substance is water-soluble and determined by SecA. ABC is the first to determine the substance specificity of abc, about50 kinds of abc are the first to determine the substance specificity of abc. YtsCD belongs to YtsB, and YtsB belongs to YtsC. YtsC belongs to YtsD. YtsD belongs to YtsC. YtsB belongs to YtsC. YtsC belongs to YtsD. YtsD belongs to YtsC. YtsB belongs to YtsC. YtsC belongs to YtsC. YtsB belongs to YtsC. YtsA belongs to YtsC. YtsC belongs to YtsC. YtsC belongs to YtsC. YtsB belongs to YtsC. YtsC belongs to YtsC. YtsB belongs to YtsC. YtsA belongs to YtsC. YtsC belongs to YtsC. A special type of transmission is required for the transmission of information.

项目成果

Isao Hirose: "Proteome analysis of Bacillus subtilis extracellular proteins : a twodimensional protein electrophoretic study"Microbiology. 146. 65-75 (2000)

Isao Hirose：“枯草芽孢杆菌胞外蛋白的蛋白质组分析：二维蛋白质电泳研究”微生物学。

Toshio Shida: "Mutational analysis of catalytic sites of the cell wall lytic N-acetylmuramoyl-L-alanine anidases CwlC and CwlV"Jounal of Biological Chemistry. 276・30. 28140-28146 (2001)

Toshio Shida：“细胞壁裂解性 N-乙酰胞壁酰基-L-丙氨酸酶 CwlC 和 CwlV 催化位点的突变分析”《生物化学杂志》276・30（2001 年）。

Hiroshi Kakeshita: "Effect of depletion of FtsY on spore morphology and the pootein composition of the spore cost layer in Bacillus sultilis"FEMS Microbiology Letters. 195. 41-46 (2001)

Hiroshi Kakeshita：“FtsY 耗尽对枯草芽孢杆菌孢子形态和孢子成本层的蛋白质组成的影响”FEMS 微生物学快报。

Makiko Murata: "Multidrug resistant phenotype of Bacillus subtilis spontaneous mutants isolated in the presence of puromycin and lincomycin"Canadian Journal of Microbiology. 49巻. 71-77 (2003)

Makiko Murata：“在嘌呤霉素和林可霉素存在下分离的枯草芽孢杆菌自发突变体的多重耐药表型”加拿大微生物学杂志 49. 71-77 (2003)。

Yamamoto,H. et al.: "CitST two component system regulates the expression of Mg-citrate transporters Bacillus subtilis"Molecular Microbiology. 37. 898-912 (2000)

山本，H.