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枯草菌細胞壁結合複合リパーゼによる超高機能油脂分解菌体の創成

使用枯草芽孢杆菌细胞壁结合复合脂肪酶创建超高性能石油降解细菌

基本信息

批准号：
12019224
负责人：
関口順一
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12019224/
关键词：
表層工学細胞壁結合ドメインリパーゼ枯草菌麹菌

项目摘要

細菌表層への蛋白質のディスプレイは経口投与による抗体産成、細胞による物質吸着、バイオリアクターなどに利用可能な新規触媒酵素をはじめ環境利用の側面からも注目されている分野である。本研究ではグラム陽性細菌で、工業的に利用されている枯草菌の表層に複数のリパーゼを人工局在させ、超高機能な細胞を育種するとともに、人工局在化に伴う問題点を抽出し、改良を加えた。まず細胞壁結合ドメイン(CWB)として、以前使用していた細胞壁溶解酵素CwlBのCWBbとはアミノ酸配列が全く異なり、さらに半分以下のサイズのCwlCのCWBcを検討して、表層局在のアンカーとして使えることを示した。そこで枯草菌のリパーゼLipBとCWBcとの融合遺伝子LipB-CWBc、麹菌リパーゼCutLとCWBbとの融合遺伝子CWBb-CutLを別々のプラスミドに載せたものと、1つのプラスミドに両方の融合遺伝子をのせ、1つのプロモーターで2つの融合遺伝子を制御できるようにしたものを構築した。次にSDS-PAGEによる表層局在化蛋白の量、活性染色による脂質分解活性を調べた。2つの融合遺伝子を含むプラスミドを持つ細胞は、誘導物質であるテトラサイクリンの存在下でともに顕著な融合蛋白質の生産が認められ、それらはともに表層に局在していた。またこれら表層局在化リパーゼの蓄積には、表層プロテアーゼ欠損株の構築が重要であることも解った。

Bacterial surface proteins are injected into the mouth to produce antibodies, cells are absorbed, and substances are absorbed into the cells. It is possible to use the new regulation catalyst enzyme and the environmental utilization side of the catalytic enzyme. This research focuses on the use of positive bacteria and industrial use of Bacillus subtilis surface layer artificial bureau In the field of breeding, ultra-high-performance cell breeding, artificial intelligence, chemical processing, extraction of problem points, improvement, and improvement.まずCell wall binding enzyme (CWB)として, previously used していたcell wall dissolving enzyme CwlBのCWBbとはアミノacid ligation systemくdifferentなり, さらに half-point or less のサイズのCwlCのCWBcを検question して, the surface round is のアンカーとして making えることをshow した.そこでsubtilis のリパーゼLipB とCWBcとのfusion legacy 伝子 LipB-CWBc, 麹 bacterium リパーゼCutL とCWBbとのfusion legacy 伝子CWBb-CutLをdifferent々のプラスミドにzai せたものと, 1 つのプラスミドに両square fusion legacy 伝子をのせ, 1つのプロモーターで2つのfusion缝子をcontrolできるようにしたものをconstruct した. The amount of localized protein in the surface layer was measured using SDS-PAGE, and the activity staining was used to adjust the lipolytic activity. 2. The remaining fusion cells contain the remaining cells and the inducing substance. Under the でともに顕出なfusion protein のproduction が recognized められ, それらはともにsurface にbureau in していた. It is important to build up the surface area of the surface layer and build up the structure of the surface area, and to solve the problem.