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枯草菌細胞壁結合複合リパーゼによる超高機能油脂分解菌体の創成

使用枯草芽孢杆菌细胞壁结合复合脂肪酶创建超高性能石油降解细菌

基本信息

批准号：
10145217
负责人：
関口順一
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10145217/
关键词：
表層工学枯草菌リパーゼゲノム細胞壁

项目摘要

細胞壁に結合させる蛋白として枯草菌分泌性リパーゼを選び、一方細胞壁結合ドメインは枯草菌細胞壁溶解酵素,CwlB,の細胞壁結合ドメインを使用した。構築した融合タンパクは細胞の表層に存在し、5MのLiClで抽出することができた。さらにこの抽出融合タンパクは塩濃度を下げると細胞壁に再吸着することがわかった。融合タンパクはリパーゼ活性を保持していたが、一方表層抽出液の中にはリパーゼ部分がなくなった細胞壁結合ドメインだけのものがモル比で等モル存在した。この結果から、表層においてもプロテアーゼの作用により分解が生じていると考えられる。一方培養上清中にはリパーゼ活性がまったく認められなかったことより、細胞壁より遊離したリパーゼは培養上溝中においてはさらに不安定で完全に分解されたものと思われる。そこで細胞壁結合性プロテアーゼWprAを欠損した株を作製し、2次元電気泳動法を用いて表層タンパク全体のスポットの変化を調べたところ、分解によるとみられるスポットが無くなり、代わりに高い分子量の位置に明確なスポットが認められた。そこでWpr欠損株で融合リパーゼタンパクを生産したところ、定常期において野生株のリパーゼ活性の低下が著しいのに対し、WprA変異株ではリパーゼ活性の減少が認められなかった。しかしSDS-PAGEではWpr欠損株においても融合リパーゼの分解が認められることより、さらに別のプロテアーゼにより分解を受けていると考えられる。

Cell wall-binding proteins are used in the production of cell wall lysozyme,CwlB, and cell wall-binding proteins. The surface layer of the cell was constructed to be fused, and 5M LiCl was extracted. In addition, the cell wall is re-adsorbed at a lower concentration. The cell wall of the cell wall is bound to the cell wall and the cell wall is bound to the cell wall. The result of this is that the surface layer is decomposed into the middle layer and the surface layer is decomposed into the middle layer. The cell wall of a culture supernatant is free, and the culture supernatant is unstable. The cell wall binding property is not good enough to control the growth of the plant. The two-dimensional electrokinetic method is used to adjust the surface layer of the plant. The decomposition of the plant is not good enough to determine the position of the high molecular weight plant. In the steady state, the activity of wild plants was decreased, and in the abnormal stage, the activity of wild plants was decreased. SDS-PAGE analysis of WPR in the absence of plant damage in the middle of the fusion, decomposition and recognition of this, this and other decomposition and acceptance of this.