ヒトデ類の自切に関与する鍵化学物質の研究

海星自切过程中关键化学物质的研究

• 批准号: 13024231
• 负责人: 浪越 通夫
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: 東京水産大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13024231/
• 关键词: キヒトデ; 自切; 自切促進因子; APF; 神経系; 体腔液; ペプチド

我々が本研究に着手するまでは日本のヒトデ類の自切に関する化学的な研究は行われていなかった。そこでまず、青森県陸奥湾および東京湾のキヒトデ(マヒトデ)を材料生物に選び、人為的な自切の誘導と生物検定法の構築、自切の過程の観察、自切誘導因子(APF)を放出する体の部位の検索、APFの安定性と化学的性状の検討、およびAPFの分離を行った。オートクレーブバッグにキヒトデを入れ、100℃の熱水に浸して自切させた時に得られる液を、正常なキヒトデの腕に注射すると自切を起こす。正常なキヒトデの体腔液では自切しない。そこで、キヒトデを熱処理したときの液を用いて生物検定法を検討した。その結果、検定用のヒトデをプラスチック製のバットの中央に置き、海水を入れない状態で1本の腕に検定液を注入する方法が再現性も良く、生物検定法として利用できることが分かった。また、幅長が4cm以下のヒトデはほとんど自切せず、5〜10cmのものが最適な被検ヒトデであることを明らかにした。生物検定試験で最も問題となるのは、生殖巣が発達するにつれて自切を起こしにくくなり、生殖時期には殆ど反応しなくなることである。よって、キヒトデを用いた生物検定試験は、5月から10月の間でのみ行なえることが分かった。東京湾のキヒトデをオートクレーブバッグに入れ、76℃の熱水に浸し、温度を徐々に100℃まで挙げて自切させた。このとき得られた液を遠心分離し、上清を凍結乾燥してAPFを含む固体を得た。これをトヨパールHW-40(0.05%NaCl水溶液で溶出)でカラムクロマトを行い、7つのフラクションに分離した。その結果、1つの溶出ピーク(Fr.6)のみに活性が見られた。Fr.6を各種のODSカラムを用いてHPLCで分析したところ、Cosmosil 5C 18-MSが最も良好な分離を示した。

We started our research on the chemistry of natural resources in Japan. Biological selection of materials, artificial induction of self-cleavage, construction of biological assay, investigation of self-cleavage process, identification of body parts from which self-cleavage induction factor (APF) is released, stability of APF, and chemical characterization, and isolation of APF are conducted in the fields of chemical analysis, biological analysis, and chemical characterization of APF. When the liquid is immersed in hot water at 100℃, the liquid is injected into the body. Normal body fluids are self-cutting. The heat treatment process is discussed by biological analysis. The results of this method show that the reproducibility of this method is excellent, and the biological assay method can be used in the central position of the system. The width is less than 4 cm, and the width is less than 5 cm. The most important problem of biological identification is that the reproductive period is not stable. In May and October, we will try our best to find out more. Tokyo Bay is surrounded by hot water at 76 ° C and a temperature of 100 ° C. The solution was separated remotely, and the supernatant was dried. This is the case for HW-40(dissolved in 0.05% NaCl aqueous solution). The results of the test, 1 test dissolution test (Fr.6) test activity test. Fr.6 was analyzed by HPLC and Cosmosil 5C 18-MS showed the best separation.