血清タンパク質の測定による野生鳥類の内分泌攪乱評価法の研究

测定血清蛋白的野生鸟类内分泌干扰评估方法研究

• 批准号: 13027220
• 负责人: 和田 勝
• 金额: $ 9.41万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13027220/
• 关键词: 鳥類; ビテロジェニン; VLDL; 内分泌攪乱; ウズラ; 就巣性; 内分泌撹乱; 超低密度リポタンパク質; エストロジェン様作用; 生殖輸管

野生鳥類における内分泌撹乱の現状を評価し、汚染との関係を明らかにする方法を確立するため、血中ビテロジェニンを指標にしてエストロジェン様攪乱を評価することにし、ウズラの血中ビテロジェニンを測定できるELISA系が確立した。これが野生鳥類に適用できるかを明らかにするため、キンカチョウを使ってデータを収集した。はじめに、キンカチョウの卵黄タンパク質をSDS-PAGEで泳動をしてウズラの卵黄タンパク質の泳動パターンと比較し、さらに、ウズラ卵黄リポビテリンを抗原としてウサギで作成したポリクローナル抗体との交叉を確認するために、ウエスターンブロッティング法で確認した。SDS-PAGEによる泳動パターンの比較とウエスターンブロッティングの結果は、キンカチョウ卵黄内に、ウズラと同じように120kDa付近に二本のバンドが抗体で認識された。キンカチョウ卵黄中にはウズラのリポビテリン抗体に交叉するリボビテリンが存在することが確認できたので、雄キンカチョウにエストラジオールを100g体重あたり0.1から公比10で1000ugまでの5段階の濃度でコーンオイル中に溶解し、7日間腹腔中に注射によって投与した。対照群はコーンオイルのみを投与した。7日間投与した後、血液を採取し、血清中のビテロジェニンをウズラビテロジェニンモノクローナル抗体によるELISAで測定し、血中エストラジオールも測定した。ビテロジェニン測定系の感度は検出限界0.0125ug/ml、エストラジオールは40pg/mlであった。血液採取後に、体重を測定し、肝臓、精巣の湿重量を測定した。体重はおよそ10gから15gなので、肝臓と精巣は10g体重あたりに換算した。上記の濃度を7日間投与したキンカチョウの肝臓の重量は群間で有意な差が認められず、精巣も1000ug投与群で減少傾向がみられたが、有意な差はなかった。エストラジオールの投与によって雄キンカチョウでも血中ビテロジェニン濃度が増加したが、0.1から10ugでは増加は認められなかった。血中のエストラジオールは1ug投与群で上昇しているが、血中ビテロジェニンの増加は認められなかった。ウズラではエストラジオール0.1ug投与で反応する個体が認められ、1ugではビテロジェニンの明らかな増加が認められるのに対して、キンカチョウではウズラに比べて明らかに反応性が低かった。ウズラのように離巣性で卵への投資量が大きな鳥類と、比較的卵への投資量が少ない就巣性の鳴禽類では、肝臓からのビテロジェニンの供給が異なることを示しているように思われた。野生鳥類での評価は、この点を考慮する必要があるだろう。

Methods for assessing the status of endocrine disturbances in wild birds and for determining the relationship between pollution and the development of an ELISA system were established. The wild birds are suitable for use in the wild. SDS-PAGE of the yolk protein of the egg yolk protein. SDS-PAGE comparison of the two proteins in the yolk, the two proteins in the yolk, and the two proteins in the yolk. In the egg yolk, the concentration of the antibody in the 5-stage solution was 0.1 g/10 g/1000ug/7 d, and the concentration was 100g/7 d/7 d. For example, if you want to buy a car, you can buy a car. 7. Blood samples were collected during the day and serum samples were collected for ELISA determination. The sensitivity of the system is 0.0125ug/ml, and the sensitivity is 40pg/ml. Blood samples, body weight, liver, semen and wet weight were measured. Weight: 10g/15g/10g Weight: 10g/15 g The concentration of the above mentioned substances decreased with the increase of concentration in the day and the decrease of concentration in the day.エストラジオールの投与によって雄キンカチョウでも血中ビテロジェニン浓度が増加したが、0.1から10ugでは増加は认められなかった。In the blood, we can see that there is a rise in the number of votes cast and a rise in the number of votes cast. It is the first time that a person has been identified as a person, and the first time that a person has been identified as a person, the second time that a person has been identified as a person, the third time that a person has been identified as a person, and the fourth time that a person has been identified as a person, the third time that a person has been identified as a person, and the fourth time that a person has been identified as a person, the fourth time that a person has been identified as a person, and the fourth time that a person has been identified as a person, and the fourth time that a person has been identified as a person, the fourth time that a person has been identified as a person, and the fourth time that a person has been identified as a person, and the fourth time that a person has been identified as a person, and the fourth time that a person has been identified as a person. The amount of investment in eggs is large, and the amount of investment in eggs is small. The amount of investment in eggs is small, and the amount of investment in eggs is small. Wild birds are evaluated and considered necessary.

项目成果

Otsuka, R., Machuida, T., Wada, M.: "Hormonal correlations at transition from reproduction to molting in an annual life cycle of Humboldt penguins (Spheniscus humboldti)."General and Comparative Endocrinology. 135. 175-185 (2004)

Otsuka, R.、Machuida, T.、Wada, M.：“洪堡企鹅（Spheniscus humboldti）年度生命周期中从繁殖到蜕皮过渡的激素相关性。”普通和比较内分泌学。

Suzuki, N., Kambegawa, A., Hattori, A.: "Bisphenol A influences the plasma calcium level and inhibit calcitonin secretion in goldfish."Zoological Science. 20. 745-748 (2003)

Suzuki, N.、Kambekawa, A.、Hattori, A.：“双酚 A 影响金鱼的血浆钙水平并抑制降钙素分泌。”动物学。

Wada, M., Shimizu, T.: "Seasonal changes in adrenocortical responses to acute stress in polygynous Male Bush Warblers (Cettia diphone)."General and Comparative Endocrinology. 135. 193-200 (2004)

Wada, M., Shimizu, T.：“一夫多妻雄性布什莺（Cettia diphone）肾上腺皮质对急性应激反应的季节性变化。”普通和比较内分泌学。

Otsuka, R., Nishiumi, I., Wada, M.: "Characterization of 12 polymorphic microsatellite loci in the Japanese bush warbler Cettia diphone."Molecular Ecology Note. 3. 44-46 (2003)

Otsuka, R.、Nishiumi, I.、Wada, M.：“日本灌木莺 Cettia diphone 中 12 个多态性微卫星位点的特征。”分子生态学笔记。

Suzuki, N., Hattori, A.: "Bisphenol A suppresses osteoclastic and osteoblastic activities in the cultured scales of goldfish."Life Sciences. 73. 2237-2247 (2003)

Suzuki, N., Hattori, A.：“双酚 A 抑制金鱼养殖鳞片中的破骨细胞和成骨细胞活性。”生命科学。