アルツハイマー病脳におけるリン酸化反応基質蛋白の動態とその病態に果たす役割

阿尔茨海默病脑中磷酸化底物蛋白的动态及其在病理学中的作用

• 批准号: 14017007
• 负责人: 辛 龍雲
• 金额: $ 4.03万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14017007/
• 关键词: アルツハイマー病; OXR蛋白; リン酸化蛋白; 酸化的ストレス

我々は既に、独自に開発した、Al^<3+>のリン酸化蛋白に対する選択的結合作用を利用したリン酸化蛋白分離法を用いて、アルツハイマー病(AD)および正常コントロール脳よりリン酸化蛋白を抽出、この溶出液を材料にして、2次元電気泳動、peptide mass finger printing、アミノ酸sequencing等による解析を経て、AD脳において発現量に変化のみられるリン酸化蛋白二十数種類を単離・同定した。このうち、AD脳で有意な減少を示した蛋白の中に、oxidation resistance protein(OXR)と名づけられた蛋白が含まれていた。これは最近発見された、酸化的ストレス障害の修復に関連した蛋白で、ADの病態との関連性で興味ある対象である。我々は、本研究において、ADの病態におけるこの蛋白の役割に焦点を当てて研究を開始した。まず、OXRリコンビナント蛋白を調整して、OXR蛋白に対する3種類のモノクロナール抗体を作製した。この抗体を用いて、AD脳(n=10)とコントロール脳(n=10)におけるOXRの発現量を検索した。コントロールに比して、AD脳全例でその発現量が低下しているということは無く、コントロールよりも増加している例も存在し、AD脳におけるOXR蛋白発現に一定のパターンは観察されなかった。OXR分子内には14箇所のSer/Thr仮想的リン酸化部位が存在する。このSer/Thr14個所すべてをsite-directed mutagenesisによってAlaに置換し、リン酸化を受けることのできない変異体OXRを調製した。この野生型OXRと変異型OXRの293細胞、N2a細胞、COS7細胞を用いた発現系を作製し、発現蛋白の生化学的検討と、酸化的ストレスに対するOXR発現あるいは非発現細胞の感受性試験を施行するための実験系を確立した。

We have developed, independently developed, Al3 +-containing acidified proteins for the binding of selected proteins, using acidified protein isolation methods for the analysis of proteins, including AD, AD The amount of protein produced by the enzyme is about 20 times higher than that of protein produced by the enzyme. This is an intentional decrease in oxidation resistance protein(OXR). Recently, it has been found that the relationship between protein and AD is very interesting. We started our research on AD by focusing on the protein pathway. The OXR protein is regulated by three kinds of antibodies. The detection of OXR was detected by the antibody, AD (n =10) and OXR (n=10). The expression of OXR protein decreased in all cases, but increased in all cases. There are 14 Ser/Thr sites in OXR molecule. These 14 Ser/Thr sites were replaced by Ala and acidified by site-directed mutagenesis, resulting in the modulation of OXR variants. The expression system of wild-type OXR and variant OXR in 293 cells, N2a cells, and COS7 cells was established by biochemical analysis of protein expression and acidification.

项目成果

Kitamoto T, Mohri S, Ironside JW, Miyoshi I, Tanaka T, Kitamoto N, Itohara S, Kasai N, Katuski M, Higuchi J, Muramoto T, Shin R-W.: "Follicular dentritic cell of the knock-in mouse provides a new bioassay for human prions."Biochem Biophys Res Corn. 294. 2

Kitamoto T, Mohri S, Ironside JW, Miyoshi I, Tanaka T, Kitamoto N, Itohara S, Kasai N, Katuski M, Higuchi J, Muramoto T, Shin R-W.：“敲入小鼠的滤泡树突状细胞提供了一种新的

Kuazi DA, Kito K, Abe Y, Shin R-W, Kamitani T, Ueda N.: "NEDD8 involvement in the ubiquitinated inclusion bodies"J Pathol. 199. 259-266 (2003)

Kuazi DA、Kito K、Abe Y、Shin R-W、Kamitani T、Ueda N.：“NEDD8 参与泛素化包涵体”J Pathol。

Shin R-W, Kruck TPA, Murayama H, Kitamoto T.: "A novel trivalent cation chelator Feralex dissociates binding of aluminum and iron associated with hyperphosphorylated tau of Alzheimer's disease"Brain Res. 961. 139-146 (2003)

Shin R-W、Kruck TPA、Murayama H、Kitamoto T.：“一种新型三价阳离子螯合剂 Feralex 可解离与阿尔茨海默氏病过度磷酸化 tau 相关的铝和铁的结合”Brain Res。

Yamamoto A, Shin R-W, Hasegawa K, Naiki H, Yoshimasu Y, Kitamoto T.: "Iron (III) induces aggregation of hyperphosphorylated tau and its reduction to iron (II) reverses the aggregation : implications in the formation of neurofibrillary tangles of Alzheimer

Yamamoto A、Shin R-W、Hasekawa K、Naiki H、Yoshimasu Y、Kitamoto T.：“铁 (III) 诱导过度磷酸化 tau 蛋白聚集，铁 (II) 还原可逆转聚集：对阿尔茨海默病神经原纤维缠结形成的影响