老化脳およびアルツハイマー病脳特異的リン酸化反応基質蛋白の同定

衰老大脑和阿尔茨海默氏病大脑特异性磷酸化底物蛋白的鉴定

• 批准号: 12210027
• 负责人: 辛 龍雲
• 金额: --
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12210027/
• 关键词: アルツハイマー病; リン酸化蛋白; アルミニウム; 老化; tau蛋白

老化に伴ってあるいはアルツハイマー病(AD)において変化する蛋白リン酸化反応の全貌を明らかにする目的で、アルミニウムイオン(Al^<3+>)のリン酸化蛋白に対する選択的結合作用に基づいた、リン酸化蛋白分離法を開発した。その原理は、Al^<3+>を固相化した担体を充填したカラムに、脳組織粗抽出液を通して、その中に含まれるリン酸化蛋白を吸着・溶出するものである。Tauをモデル蛋白としてこのカラムの分離能を検討した結果、このカラムによる蛋白の吸着は、標的蛋白のリン酸化に依存し、そのリン酸化の程度に応じて、吸着の効率が決まることが示された。AD脳組織を対象にして、このリン酸化蛋白分離法の実用性に関する予備実験を行った。AD脳組織抽出液をこのカラムに吸着させた後の溶出液を二次元電気泳動にかけ約60の蛋白スポットを単離した。切り出したそれぞれのスポットを蛋白分解処理後、得られたペプチドの分子量を測定し、peptide mass finger printingに基づいた蛋白検索を行った結果、19の既知の蛋白が同定された。この中にはAD脳病変形成への関与については未検索の蛋白と共にAD脳NFTの形成に関与することが示された蛋白(collapsin response mediator protein等)が含まれていた。今後この方法を用いて、老年脳あるいはAD脳において特異的に量的変化を来すリン酸化蛋白基質を単離・同定する。リン酸化蛋白の同定は、細胞内における特定のリン酸化反応の様相を解明する上で重要であると共に、老化あるいはADに伴って変化する生物学的反応系の全貌を明らかにし、細胞レベルにおける老化とそれに関連する病態のメカニズムを解明する一助となるものと期待される。

Aging is associated with the development of a protein acidification pathway that is characterized by the presence of an enzyme in the protein (Al^<3+>) and the binding of an enzyme to an enzyme. The principle is that Al^<3+> solidification, carrier filling, tissue extraction, adsorption and dissolution of acidified proteins are possible. The separation energy of Tau protein and its derivatives was investigated. The results showed that the adsorption of Tau protein and its derivatives depended on the degree of acidification. The adsorption efficiency was determined. Preparations related to the practicality of this denatured protein separation method were carried out based on the AD tissue. AD tissue extract: about 60 protein fractions after adsorption: 2D electrophoresis After protein decomposition treatment, the molecular weight of the protein was determined, and the protein was determined by peptide mass finger printing. This is the case with AD/NFT formation, which is not detected in the protein and protein (collapsible response mediator protein). In the future, this method will be used to determine the specific amount of protein. A complete picture of the biological reaction system is revealed, including the identification of specific proteins in the intracellular DNA, the identification of specific proteins in the intracellular DNA, and the identification of specific proteins in the cellular DNA.

项目成果

Ryong-Woon Shin: "Aluminum, tau and neurofibrillary degeneration : in Aluminum and Alzheimer's disease (edited bu Chris Exley),"Elsevier(in press). (2001)

Ryong-Woon Shin：“铝、tau 蛋白和神经原纤维变性：铝和阿尔茨海默病（Chris Exley 编辑）”，爱思唯尔（出版中）。