B型肝炎ウイルスの逆転写酵素阻害剤耐性の分子基盤とその制御

乙型肝炎病毒逆转录酶抑制剂耐药的分子基础及其调控

• 批准号: 14021024
• 负责人: 加藤 直也
• 金额: $ 3.07万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14021024/
• 关键词: B型肝炎ウイルス; 薬剤耐性; 逆転写酵素; DNAポリメラーゼ; ラミブジン; Adefovir; MCC-478; Entecavir

わが国にはなお120-140万人のB型肝炎ウイルス(HBV)キャリアが存在するが,いまだ満足すべき抗ウイルス療法が確立していない.新たな抗ウイルス療法として,逆転写酵素阻害剤であるラミブジンがB型慢性肝炎に用いられているが,長期投与を受けた患者の17-75%に耐性ウイルスの出現が報告され重大な問題となっている.本研究では,薬剤耐性の分子基盤を明らかにし,さらに,効率的な新規薬剤の開発,抗ウイルス効果の検証を目指すものである.まず,HBVのin vitro複製系を用いて,ラミブジン耐性変異株の複製能につき検討した.ラミブジン耐性株として,L528M, M552I, M552V, L528M/L552I, L528M/M552Vの5種を作成し,これらを肝癌細胞株に導入し,Southern blotによりHBVの複製につき検討した.その結果,M552I, M552Vでは野生株に比し,その複製能が著しく減弱していたが,L528Mが加わることにより,複製能が回復することが明らかになった.引き続き,野生株および臨床的に認められるM552V, M552I, L528M/M552Vの3種のラミブジン耐性株に対し,21種の逆転写酵素阻害剤の効果につき比較検討した.21種の逆転写酵素阻害剤のうち,4種(MCC-478, Adefbvir, Entecavir, Lobucavir)のみがすべてのラミブジン耐性株に対して有効であった.MCC-478は濃度依存性にHBVの複製を阻害し,HBVの複製を50%阻止するのに必要な薬剤濃度(EC_<50>)はM552Vに対し3.3μM, M552Iに対し2.6μM, L528M/M552Vに対し2.0μMであり,野生株のみならずすべてのラミブジン耐性株に対して強力な抗ウイルス効果を示した.MCC-478はB型肝炎の抗ウイルス療法における単剤あるいは併用療法の有力な候補と考えられた.

Hepatitis B virus (HBV) infection exists in 1.2 - 1.4 million people in China, and anti-HBV therapy is well established. With the new anti-hepatitis therapy, reverse transcriptase enzyme inhibitors have become increasingly useful for chronic hepatitis B. However, 17-75% of patients who have received long-term treatment are resistant to the emergence of hepatitis and have reported major problems. This study aims to clarify the molecular basis for drug resistance, and to develop new effective drug agents and provide guidance for the detection of drug resistance effects. In addition,HBV replication in vitro was studied in vitro, and the replication ability of resistant strains was investigated. Five HBV resistant strains, L528M, M552I, M552V, L528M/L552I and L528M/M552V, were constructed and introduced into hepatoma cell lines. Southern blot was used to detect HBV replication. As a result, M552I, M552V are able to replicate more effectively than wild plants, and L528M is able to replicate more effectively than wild plants. The wild strains were identified as M552V, M552I, L528M/M552V, and the resistant strains were identified as M552V, M552I, L528M/M552V, and the resistant strains were identified as M552V, M552I, L528M/M552V.(MCC-478, Adefbvir, Entecavir, Lobucavir) is a concentration-dependent inhibitor of HBV replication. The concentrations of the necessary chemicals (EC_ ) for 50% inhibition of HBV replication are <50>3.3μM for M552V, 2.6μM for M552I, 2.0μM for L528M/M552V, The wild strain is resistant to hepatitis B.MCC-478 is resistant to hepatitis B.

项目成果

Otsuka M et al.: "Differential cellular gene expression induced by hepatitis B and C viruses"Biophys Biochem Res Commun. 300. 443-447 (2003)

Otsuka M 等人：“乙型肝炎和丙型肝炎病毒诱导的差异细胞基因表达”Biophys Biochem Res Commun。

加藤直也 他: "B型肝炎の抗ウイルス療法 In : Annual Review 2003消化器"中外医学社. 173-177 (2003)

Naoya Kato 等人：“乙型肝炎的抗病毒治疗：2003 年胃肠病学年度评论”Chugai Igakusha 173-177 (2003)。

Moriyama M et al.: "Relavance Network between Chemosensitivity and Transcriptome in Human Hepatoma Cells"Mol Cancer Ther. 2. 199-205 (2003)

Moriyama M 等人：“人肝癌细胞化学敏感性和转录组之间的相关网络”Mol Cancer Ther。

Ono-Nita SK et al.: "Novel Nucleoside Analogue MCC-478 (LY582563) Is Effective Against Wild-Type or Lamivudine-Resistant Hepatitis B Virus"Antimicrob Agents Chemother. 46. 2602-2605 (2002)

Ono-Nita SK 等人：“新型核苷类似物 MCC-478 (LY582563) 可有效对抗野生型或拉米夫定耐药性乙型肝炎病毒”抗微生物药物化疗。

Hoshida Y et al.: "Identification of genes associated with sensitivity to 5-fluorouracil and cisplatin in hepatoma cells"J Gastroenterol. 37. 92-95 (2002)

Hoshida Y 等人：“肝癌细胞中与 5-氟尿嘧啶和顺铂敏感性相关的基因的鉴定”J Gastroenterol。