レトロウイルスベクターを用いた養子免疫遺伝子細胞療法の確立

利用逆转录病毒载体建立过继性免疫基因细胞疗法

• 批准号: 14030008
• 负责人: 小野寺 雅史
• 金额: $ 3.78万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14030008/
• 关键词: 遺伝子治療; ウイルス; トランスレーショナルリサーチ; 免疫学; 癌

[目的]レトロウイルスベクターを用いてガン関連遺伝子を導入した造血前駆細胞をサイトカインで樹状細胞(DC)へと分化誘導し、これら感染DCで免疫するか、あるいは末梢血リンパ球と共培養することで効率良く腫瘍特異的細胞傷害性T細胞を樹立する。[方法]当教室で開発したレトロウイルスベクターGCDNsamI/Eにガン抗原ovalbumin(OVA)遺伝子を組込み、水庖性口内炎ウイルス由来のG蛋白質でパッケージしたOVA発現ウイルスを作製し、ウイルス感染にてOVA遺伝子をマウス造血前駆細胞(c-KIT陽性lineage陰性細胞)に導入、最終的にはGM-SCFとIL-4でOVA発現DC(DC/OVA)へと分化誘導させた。[結果]DC/OVAはCD11c、CD40、MHC classII、CD86が強陽性で、サイトカインで細胞数を増加させたことから未処置の骨髄から得られるDCの約17倍のDCを得ることができた。次にDC/OVAの抗原提示能を確認するため、B3Z(OVA拘束性T細胞ハイブリドーマで抗原提示細胞がOVAペプチドをclassI上に提示することで細胞内LacZが活性化する細胞)と共培養したところ、OVA発現胸腺腫(EL-4)と同程度のB3Zの活性化を示した。また、DC/OVAをマウスに免疫したところ、OVA発現腫瘍のみを完全に拒絶し、さらにはマウス血液中に抗OVA抗体も出現した。[考察]以上の結果からウイルスベクターにより高発現したOVAが細胞内でプロセスされ、細胞内抗原としてclassI上で提示されたことが示唆された。また、抗体産生を認めたことから、CD4^+T細胞に対してもOVAペプチドがclassII上で提示された可能性が示唆され、本法は細胞性、液性の両免疫を賦活化できることからヒトCD34陽性造血前駆細胞を用いることでヒト腫瘍細胞に対する有用な養子免疫遺伝子細胞治療となると考えられた。

[objective] to induce the differentiation of pre-hematopoietic progenitor cells (DC), infect them with DC immune antibodies, and co-culture the cells with a good rate of infection in peripheral blood. [methods] when GCDNsamI/E antigen ovalbumin (OVA) was detected in the classroom, G-protein was detected in OVA, and c-KIT-specific lineage progenitor cells (c-KIT-specific lineage progenitor cells) were transferred in infected children. The most popular GM-SCF IL-4 OVA shows that DC (DC/OVA) differentiates from the wizard. [results] DC/ OVA CD11c, CD40, MHC classII, CD86 were strong, and the number of cells was significantly higher than that of CD11c, DC, CD11c, MHC classII, CD11c, CD The secondary "DC/OVA" antigen hint can confirm the activation of the thymus (EL-4), B3Z (OVA binding T cell antigen), B3Z (OVA binding T cell antigen), B3Z antigen (classI), intracellular LacZ (intracellular B3Z), and B3Z (B3Z). Anti-OVA antibodies were detected in the blood of mice immunized with anti-OVA antibodies, anti-OVA antibodies were detected in the blood, anti-OVA antibodies were detected in the blood. [investigation] the above results showed that the OVA cells were detected in the presence of intracellular antigens and intracellular antigens on classI. Antibodies, CD4, antibodies, CD4, CD

项目成果

Onodera M: "Gene delively to manmmalian cells in culture : methods and protocols"Humana Press(in press). (2003)

Onodera M：“在培养物中向哺乳动物细胞传递基因：方法和方案”Humana Press（正在印刷中）。

Hirasawa R., et al.: "Essential and Instructive Roles of GATA Factors in Eosinophil Development"J Exp Med. 195. 1379-1386 (2002)

Hirasawa R. 等人：“GATA 因子在嗜酸性粒细胞发育中的重要和指导性作用”J Exp Med。

Suzuki A, et al.: "Modified retrovirus vector system for ex vivo gene therapy for neurological disorders"J Neurochem. 82. 953-960 (2002)

Suzuki A 等人：“用于神经系统疾病离体基因治疗的改良逆转录病毒载体系统”J Neurochem。

Osawa M, et al.: "Erythroid expansion mediated by the Gfi-1B zinc finger protein : role in normal hematopoiesis"Blood. 100. 2769-2777 (2002)

Osawa M 等人：“Gfi-1B 锌指蛋白介导的红细胞扩张：在正常造血中的作用”血液。

Iwama A, et al.: "Reciprocal roles for C/EBP and PU.1 transcription factors in langerhans cell commitment"J.Exp.Med.. 195. 547-558 (2002)

Iwama A 等人：“C/EBP 和 PU.1 转录因子在朗格汉斯细胞定型中的相互作用”J.Exp.Med.. 195. 547-558 (2002)