ヒトiPS細胞を利用したB型肝炎再活性化時の宿主自然免疫応答機構の解明と治療開発

使用人类 iPS 细胞阐明乙型肝炎再激活期间宿主先天免疫反应机制和治疗开发

• 批准号: 17H06655
• 负责人: 金子 俊
• 金额: $ 1.75万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017-08-25 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17H06655/
• 关键词: B型肝炎ウイルス; iPS細胞; C型肝炎ウイルス; 免疫; 肝疾患治療; 細胞・組織; 発生・分化; トランスレーショナルリサーチ

研究代表者らは、これまでに確立してきたヒトinduced pluripotent stem cells (iPS細胞)の肝前駆細胞誘導・肝細胞成熟化誘導および肝炎ウイルス感染機構研究の学術・技術基盤を元に、(1)ヒトiPS細胞由来肝細胞系譜細胞を利用したB型肝炎ウイルス(HBV)再活性化の分子機構の解明、及びHBV-宿主相互作用における自然免疫応答の解析を行った。さらに、(2) Cytochrome P450 (CYP)発現が生体肝細胞に近いiPS由来肝細胞系譜細胞を利用して、スタチン系新規抗HBV薬候補薬における抗HBV機構の解析、及び宿主間でのCYP発現差異による影響を解析する研究を遂行し、以下の実績を得た。まず、従来プロトコールに技術的改良を加えた誘導法を用いてmodified-iPS-Hepsを誘導した結果、代謝酵素活性、肝細胞成熟化マーカー発現、HBV及びHCVの生活環に関する宿主因子発現の全てでこれまでのiPS-Hepsに比べて改善していた。この細胞を用いて、HBVとHCV共感染培養系を確立した。本培養系では、培養上清中のHCVコア抗原、細胞内HCV-RNA発現は、HCV単独感染に比して有意に高かった。逆にHBV関連蛋白・RNAの発現はHBV単独感染に比して有意に低かった。共感染培養モデルを用いて、SofosbuvirによるHCV排除時のウイルス動態を検討し、HBV-HCV共感染時のHBV活性化を示唆する現象がin vitroで確認し、本成果について米国肝臓病学会の年次総会で口演発表を行った。また、数種のスタチン系製剤の抗HBV作用に関してスクリーニングを行い、特にSimvastatinは濃度依存性に細胞内HBV-DNA発現の低下がみられ、Heme oxygenase-1が効果に関与する可能性が示された。

The representative of the research is to make sure that the pre-hepatic cells of iPS cells lead to the maturation of liver cells and the mechanism of hepatitis B virus infection. (1) the molecular mechanism of reactivation of hepatitis B virus virus (HBV) by using the molecular mechanism of reactivation of hepatitis B virus (HBV). And "HBV- host interaction", "natural immunity", "analysis", "line". In vivo, (2) Cytochrome P450 (CYP), it was found that the recent iPS of living liver cells was obtained by using the new standard of anti-HBV phenotype, anti-HBV mechanism analysis, and host-to-host CYP response analysis, and the following tests were successful. In recent years, the improved modified-iPS-Heps technology was used to improve the results of iPS-Heps, enzyme activity, liver cell maturation and host factors in the living environment of HBV and HCV. The cells were co-infected with HBV virus and HCV to confirm the infection. In this culture, HCV antigen, intracellular HCV-RNA antigen and HCV infection in the supernatant were higher than those in the supernatant. Reverse HBV protein RNA showed that the infection rate of HBV alone was lower than that of intentional infection. The activation of HBV during co-infection test, Sofosbuvir test and HCV exclusion test, and HBV activation test during co-infection were demonstrated as confirmation by in vitro, and this result is related to the oral performance table of the American Society of Hepatology. The effects of anti-HBV drugs on anti-Heme oxygenase-1 activity, the presence of low levels of intracellular HBV-DNA in specific Heme oxygenase-1 concentration-dependent cells, and the possibility of anti-Heme oxygenase-1 effects are also shown in this study.

项目成果

ヒトiPS 細胞由来肝細胞系譜細胞を用いたB 型肝炎ウイルス感染への宿主自然免疫応答の解析

使用人 iPS 细胞衍生的肝细胞谱系细胞分析宿主对乙型肝炎病毒感染的先天免疫反应

• 发表时间: 2017
• 作者: 金子 俊;柿沼 晴;朝比奈靖浩
• 通讯作者: 朝比奈靖浩

A novel culture model for coinfection of hepatitis B and hepatitis C viruses using human induced pluripotent stem cell-derived hepatic cells for analyses of changes in host-innate immune responses.

乙型肝炎和丙型肝炎病毒共感染的新型培养模型，使用人诱导多能干细胞衍生的肝细胞来分析宿主先天免疫反应的变化。

• 发表时间: 2017
• 作者: Kaneko S;Kakinuma S;Asahina Y;Kamiya A;Miyoshi M;Tsunoda T;Inoue-Shinomiya E;Nitta S;Sato A;Asano Y;Nagata H;Kawai-Kitahata F;Murakawa M;Itsui Y;Nakagawa M;Azuma S;Watanabe M.
• 通讯作者: Watanabe M.

ITPA gene variation and ribavirin-induced anemia in patients with genotype 2 chronic hepatitis C treated with sofosbuvir plus ribavirin.

使用索磷布韦加利巴韦林治疗的基因型 2 慢性丙型肝炎患者的 ITPA 基因变异和利巴韦林诱发的贫血。

• DOI: 10.1111/hepr.12867
• 发表时间: 2017
• 期刊: Hepatol Res
• 影响因子: 4.2
• 作者: Murakawa M;Asahina Y;Nagata H;Nakagawa M;Kakinuma S;Nitta S;Kawai-Kitahata F;Otani S;Kaneko S;Miyoshi M;Tsunoda T;Asano Y;Sato A;Itsui Y;Azuma S;Nouchi T;Furumoto Y;Asano T;Chuganji Y;Tohda S;Watanabe M.
• 通讯作者: Watanabe M.

ヒトiPS 細胞培養系を利用したHBV-HCV 共感染下でのHCV 排除により惹起されるHBV の再活性化メカニズムの解明

使用人 iPS 细胞培养系统阐明 HBV-HCV 共感染下 HCV 消除诱导的 HBV 再激活机制

• 发表时间: 2017
• 作者: 金子 俊;柿沼 晴;朝比奈靖浩;渡辺 守;他
• 通讯作者: 他

The analysis of NS5A Resistance-Associated Substitutions (RAS): In vitro study of NS5A recombinant hepatitis C in infectious cell culture system for various RAS detected after treatment failure in chronic hepatitis C patients.

NS5A耐药相关替代（RAS）分析：针对慢性丙型肝炎患者治疗失败后检测到的各种RAS，在传染性细胞培养系统中进行NS5A重组丙型肝炎的体外研究。

• 发表时间: 2017
• 作者: Nitta S;Murakawa M;Kato T;Sato A;Tsunoda T;Miyoshi M;Asano Y;Kaneko S;Nagata H;Kawai-Kitahata F;Itsui Y;Nakagawa M;Azuma S;Kakinuma S;Asahina Y.
• 通讯作者: Asahina Y.