レトロウイルスベクターを用いた養子免疫遺伝子細胞療法の確立

利用逆转录病毒载体建立过继性免疫基因细胞疗法

• 批准号: 15025213
• 负责人: 小野寺 雅史
• 金额: $ 3.07万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15025213/
• 关键词: 遺伝子治療; ウイルス; 癌; 免疫学; トランスレーショナルリサーチ

レトロウイルスベクターを用いて癌関連遺伝子を導入した造血前駆細胞を、サイトカインにて樹状細胞(DC)へと分化・誘導し、これら遺伝子導入DCを用いた効率の良い腫瘍特異的細胞傷害性T細胞(CTL)の誘導法を確立する。[方法・結果]レトロウイルスベクターGCDNsamI/Eにてovalbumin(OVA)遺伝子を導入したマウス造血前駆細胞(c-KIT陽性Lineage陰性細胞)を、GM-SCFとIL-4存在下で培養し、OVA発現DC(OVA/DC)へと分化誘導させた。これら遺伝子導入細胞は形態学的にDCであり、表面マーカーとしてCD11c、CD40、CD80は強陽性であった。また、EGFPをマーカーとした遺伝子導入効率は80%を超えた。治療モデルとして、これらOVA/DCをOVA発現胸腺腫(EG7)担癌マウスに接種したところ、免疫されたマウスは腫瘍を完全に排除し、移植後50日目に再移植したEG7も拒絶した。Lysis spotの結果、これらマウスにおいてOVAペプチドで免疫したマウスの約4倍多い腫瘍特異的CTLが認められ、さらにはマウス血清中に抗OVA抗体も検出された。また、これら抗腫瘍効果はMHC class II KOマウスで減弱した。[考案]以上の結果から、今回のOVA/DCを用いたワクチン療法により細胞性免疫のみならず、MHC class IIを介したOVA特異的CD4陽性T細胞の誘導も認められ、今回の抗腫瘍効果におけるCD4陽性細胞の重要性が示唆された。今後は、適当な腫瘍抗原を選択することで、汎用性の高いガンワクチンとしての臨床応用が期待できると思われる。

To establish a method for inducing tumor-specific cytotoxic T cells (CTL) by introducing cancer-associated genes into hematopoietic progenitor cells, dendritic cells (DC), differentiation, induction, and introduction of cancer-associated genes into DC. [Methods·Results] Ovalbumin(OVA) gene was introduced into hematopoietic progenitor cells (c-KIT positive Lineage negative cells) and cultured in the presence of GM-SCF IL-4 to induce DC(OVA/DC) differentiation. The expression of CD11c, CD40 and CD80 was strongly positive in the cell morphology. The percentage of EGFP introduced was 80%. Treatment: OVA/DC found thymoma (EG7). Vaccination: OVA/DC completely excluded thymoma (EG7). Lysis spot results, anti-OVA antibody detection in serum about 4 times more MHC class II KO is the most powerful anti-tumor agent in the world. The above results demonstrate the importance of CD4-positive cells in the induction of cellular immunity, MHC class II and OVA-specific CD4-positive T cells in the treatment of OVA/DC. In the future, the selection of appropriate tumor antigens is expected to be widely used in clinical practice.

项目成果

Okada T, et al.: "In situ generation of pseudotyped retroviral progeny by adenovirus-mediated transduction of tumor cells enhances the killing effect of HSV-tk suicide gene therapy in vitro and in vivo"J.Gene Medicine. 6. 288-299 (2004)

Okada T 等人：“通过腺病毒介导的肿瘤细胞转导原位生成假型逆转录病毒子代可增强 HSV-tk 自杀基因疗法在体外和体内的杀伤效果”J.Gene Medicine。

Fujiki Y, et al.: "Successful multilineage engraftment of human cord blood cells in pigs after in utero transplantation"Transplantation. 75. 916-922 (2003)

Fujiki Y 等人：“子宫内移植后人类脐带血细胞在猪体内成功进行多谱系移植”。

Shibuya K, et al.: "CD226 (DNAM-1) is involved in LFA-1 costimulatory signal for naive T cell differentiation and proliferation"J Exp Med. 198. 1829-1839 (2003)

Shibuya K 等人：“CD226 (DNAM-1) 参与幼稚 T 细胞分化和增殖的 LFA-1 共刺激信号”J Exp Med。

Onodera M: "Delivery of genes to hematopoietic stem cells"Methods Mol Biol. 246. 527-539 (2004)

Onodera M：“将基因传递至造血干细胞”方法 Mol Biol。

Yamada M, et al.: "Neurogenesis in olfactory bulb identified by retroviral labeling in normal and MPTP-treated adult mice"J.Neuroscience. 124. 173-181 (2004)

Yamada M 等人：“在正常和 MPTP 处理的成年小鼠中通过逆转录病毒标记鉴定嗅球的神经发生”J.Neuroscience。