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PrP pre-mRNA 3'プロセッシング異常と神経細胞死の分子機構解明

阐明PrP pre-mRNA 3加工异常与神经元细胞死亡的分子机制

基本信息

批准号：
14035244
负责人：
坂口末廣
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々が作製したプリオン蛋白(PrP)欠損マウスでは、残存PrPのプロモーターから転写されたpre-mRNAは、PrPの最終エクソンにポリAシグナルが存在するにも関わらず、3´プロセッシングに異常を来し、下流に存在するPrP類似蛋白(PrPLP)の翻訳領域を含む最終エクソンまで伸長していた。その後、PrPとPrPLP遺伝子の間でintergenic splicingが起こり、残存PrPとPrPLPとからなるキメラmRNAが産生され、PrPLPが脳内に過剰発現するようになっていた。今回、pre-mRNAの3´プロセッシングの分子機構を解明するため、まずPrP欠損マウスで欠損しているどの領域がこの異常に関与しているのか検討することにした。このため、欠損部位を含む約3kbのPrP遺伝子をPrPLP遺伝子の最終エクソンに繋ぎ、上流にsplicing donor siteを持つ発現ベクターに挿入した。また、責任部位を決定するために、欠損部位の様々な領域を欠くコンストラクトも構築した。この時、PrPのORFを赤色蛍光蛋白遺伝子のORFと、PrPLPのORFを緑色蛍光蛋白遺伝子のORFと置換し、3´プロセッシングの異常を蛍光で簡便に検出できるようにした。これらのコンストラクトをCOS7細胞に導入した結果、PrP遺伝子の最終エクソンに隣接するイントロン2の28bpが責任部位であることが分かった。さらに、この領域に存在するsplicingに必要なsplicing acceptor siteやbranching siteに変異を導入し結果、これらの変異は正常な3´プロセッシングを阻害した。このことは、pre-mRNAの3´プロセッシングとスプライシングが機能的に関連していることを示した。

PrP protein (PrP) is deficient in protein expression, and the remaining PrP protein expression is pre-mRNA, PrP protein expression is final protein expression, PrP protein expression is abnormal in protein expression, PrP protein expression is downstream protein expression, PrP protein expression is final protein expression. After PrP, PrPLP and PrPLP gene are generated, PrP and PrPLP mRNA are generated, PrPLP and PrPLP mRNA are generated, PrPLP and PrPLP mRNA are generated. The molecular structure of the pre-mRNA 3-mer molecule is understood to be related to the abnormal state of the pre-mRNA 3-mer molecule. The defect site contains about 3kb of PrP gene, PrPLP gene, and the final defect site, upstream splicing donor site, is located in the center of the defect site. To determine the position of responsibility, to determine the position of loss, to determine the position of loss. In this case, the ORF of PrP is red, the ORF of PrPLP is green, and the ORF of PrPLP is replaced. The 28bp responsible site of the PrP gene was identified as a result of its introduction into COS7 cells. In addition, the domain exists in the necessary splicing acceptor and site branching site to introduce different results, such as different normal 3 "to prevent damage. The expression of pre-mRNA is related to its function.