分子シャペロンによるビタミンD受容体のリガンド結合能獲得機構の解明

阐明分子伴侣获得维生素D受体配体结合能力的机制

• 批准号: 14037264
• 负责人: 森島 嘉宏
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Osaka City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14037264/
• 关键词: 分子シャペロン; ステロイドホルモン受容体; ビタミンD; hsp70; hsp40

ステロイドホルモンが標的細胞でその機能を発現するにはまずその受容体との結合が必要となる。グルココルチコイド受容体(GR)、プロゲステロン受容体(PR)においては、脂溶性リガンドとの結合能を獲得するためには受容体が合成された後にhsp90をはじめとする分子シャペロン系の協調作用によりステロイド結合領域の疎水性部位が開かれることが必要である。一方、ステロイドホルモン受容体に属するビタミンD受容体(VDR)がリガンドと結合する際に同様の機構が関与し、受容体の構造および機能の変化がもたらされるかは明らかではない。今回の研究ではVDRがリガンドとの結合能を獲得する過程にGRやPRにおけるのと同様な分子シャペロン系の作用機構が存在しているかどうか生化学的なアプローチを試みた。これまでの研究により、熱変性を受けてリガンド結合能が失われたVDRがウサギreticulocyte lysate (RL)によりリガンド結合能が復元されることを示す実験系、reticulocyte lysate renaturation systemを確立し、この復元がATP依存的、K^+依存的な現象であること、また、この実験系の作用にはhsp70が必須であることを見い出した。一方、この実験系ではGRで得られた結果とは異なり、hsp90は関与していないと考えられた。さらに、RLに含まれる、hsp70以外の何らかの因子がこの系に関与しており、hsp70の機能に対し触媒的に作用することを示唆する実験結果も得た。また、実験結果からhsp70の内在性ATPaseを触媒的に活性化することが知られるhsp40がこの候補に挙げられることが強く示唆された。現時点でバキュロウイルスにVDRのcDNAを導入し、感染させた昆虫細胞内での過剰発現をもたらす系を作ることにすでに成功しており、細胞内可溶性蛋白質の0.001%のみを占めるVDRの解析を飛躍的に効率良く進めることができると期待される。今後はこの過剰発現系を用いさらにエキサイティングな研究へと発展させたい。

The cellular device of the hospital is able to detect the tolerance of the recipient in combination with the necessary equipment. The combination of GR, PR, and fat-soluble compounds can lead to the conclusion that after the synthesis of the capacitive body, the molecular structure of the capacitor is a system of coordination and coordination. In combination with the water-borne parts of the field, it is necessary to use the necessary information. On the one hand, the recipient is registered as the recipient and the recipient (VDR) is registered as the recipient. In combination with the same mechanism, the recipient is able to improve the performance of the system. In this study, we have been able to find out that there is a laboratory test of VDR biochemistry in the same molecular system through the study of the combination of GR and PR biochemistry. In this study, you can use the combination of VDR information reticulocyte lysate (RL) health data analysis to indicate that the system, reticulocyte lysate renaturation system system, ATP-dependent, K^ +-dependent data must be affected by the hsp70 system. On the one hand, please contact the GR. The results show that the results are not correct, and the results of the hsp90 test are not correct. The factors other than RL and hsp70 are related to the effect of the catalyst on the function of the catalyst. The results show that the results are satisfactory. The results show that the activation of the hsp70 intrinsic ATPase catalyst is sensitive to the hsp40 response. At different times, the VDR cDNA was introduced, and the infected insects were infected. The results showed that the virus was successfully detected, and the soluble protein in the cell accounted for 0.001% of the total cost of VDR analysis. In the future, the main purpose of this study is to conduct research and development in the future.

项目成果

Murphy, P.J.M.: "Stoichiometry, abundance, and functional significance of the hsp90/hsp70-based multiprotein chaperone machinery in reticulocyte lysate"Journal of Biological Chemistry. 276. 30092-30098 (2001)

Murphy, P.J.M.：“网织红细胞裂解液中基于 hsp90/hsp70 的多蛋白伴侣机制的化学计量、丰度和功能意义”生物化学杂志。

Pratt, W.B.: "Role of Molecular Chaperones in Steroid Receptor Action in Essays in Biochemistry"Portland Press, London, U.K.. 20 (2003)

Pratt, W.B.：“生物化学论文中类固醇受体作用中分子伴侣的作用”波特兰出版社，伦敦，英国。20 (2003)