内分泌撹乱物質による核内受容体SXRを介した乳癌細胞における標的遺伝子の同定

内分泌干​​扰物介导的核受体SXR介导的乳腺癌细胞靶基因的鉴定

• 批准号: 14042269
• 负责人: 小澤 安則
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Okinaka Memorial Institute for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14042269/
• 关键词: 内分泌撹乱物質; SXR; MDR1; DEHP; SRC-1; ドミンナントネガティブ; ビスフェノールA; 多剤耐性; フタル酸化合物; ポリ塩化ビニル

はじめに)癌細胞が多剤耐性を獲得する機序のひとつにMDR1遺伝子の高発現があげられる。MDR1は核内ホルモン受容体SXRにより発現調節されるが、内分泌撹乱物質であるビスフェノールAやDEHPはSXRにリガンドとして結合しMPR1発現を増加させる。一般に変異受容体には正常受容体の機能を阻害するドミナントネガティブ作用がある。本研究は1)変異SXRの作成と機能解析、2)癌細胞に変異SXRを過剰発現させ内因性SXRの機能を阻害してMDR1発現が抑制されるかを検討し多剤耐性に対する遺伝子治療の可能性を探る。方法)434アミノ酸SXRのC端13個を欠失した変異SXR(MUT-SXR)、野生型SXR(WT-SXR)、そしてMDR1プロモーター領域を組み込んだMDR1-TK-LUCレポーターをCV1細胞にトランスフェクトしレポーターアッセイをおこなった。さらにMDR1 mRNA測定のためリアルタイムPCRを大腸癌細胞株LS174T細胞を用いておこなった。結果)レポーターアッセイでリファンピシン刺激によるWTの転写活性化はMUTにより抑制された。このドミナントネガティブ効果の機序を知るため2-ハイブリッド法によりcoactivator(SRC-1)やcorepressor(NCoR, SMRT)とSXRの結合を検討した。SRC-1はWTとRFP依存性に結合したが、MUTとは結合しなかった。一方NCoRやSMRTはWTに比してMUTとより強く結合した。リアルタイムPCRによるMDR1 mRNA定量法を確立しLS174T細胞でMDR1 mRNAはリファンピシン依存性に約5倍増加した(10μM)。考察)MUT-SXRはドミナントネガティブ効果によりMDR1発現を抑える可能性が示唆された。現在LS174T細胞にMUT-SXRを過剰発現させた株を作成しリアルタイムPCRにてMDR1発現を評価中である。

Multiple endurance tests in cancer cells were sequenced in order to detect the presence of MDR1 infection. In the nucleus of MDR1, the receptor SXR was detected. The endocrine disorder was detected. The endocrine disorder was detected. The DEHP was detected by the combination of MPR1 and MPR1. In general, the normal capacitive body can prevent the function of the normal capacitive body. In this study, 1) the ability of SXR to perform machine analysis, and 2) the possibility of anti-MDR1 in cancer cells was studied. 2) the intrinsic SXR mechanism in cancer cells was able to block the development of MDR1. Methods) 434 SXR

项目成果

Toshiharu Iwasaki et al.: "Polychlorinated biphenyls suppress thyroid hormone-induced transactivation."Biochemical and Biophysical Research Communications. 299・3. 384-388 (2002)

Toshiharu Iwasaki 等人：“多氯联苯抑制甲状腺激素诱导的反式激活。”生物化学和生物物理研究通讯 299・3 (2002)。

Wataru Miyazaki et al.: "Polychlorinated biphenyls (PCBs) suppress thyroid hormone (TH) receptor (TR)-mediated transcription through a novel mechanism"The Journal of Biological Chemistry. (発表予定). (2004)

Wataru Miyazaki 等人：“多氯联苯 (PCB) 通过一种新机制抑制甲状腺激素 (TH) 受体 (TR) 介导的转录”《生物化学杂志》（即将出版）。

Akira Takeshita et al.: "Putative role of the orphan nuclear receptor SXR (steroid and xenobiotic receptor) in the mechanism of CYP3A4 inhibition by xenobiotics."The Journal of Biological Chemistry. 277・36. 32453-32458 (2002)

Akira Takeshita 等人：“孤儿核受体 SXR（类固醇和异生素受体）在异生素抑制 CYP3A4 机制中的推定作用。”《生物化学杂志》277·32458（2002）。

Toshiharu Iwasaki et al.: "Polychlorinated biphenyls suppress thyroid hormone-induced transactivation"Biochemical and Biophysical Research Communications. 299・3. 384-388 (2002)

Toshiharu Iwasaki 等人：“多氯联苯抑制甲状腺激素诱导的反式激活”生物化学和生物物理研究通讯 299・3（2002）。

Akira Takeshita et al.: "Putative role of the orphan nuclear receptor SXR (steroid and xenobiotic receptor) in the mechanism of CYP3A4 inhibition by xenobiotics"The Journal of Biological Chemistry. 277・36. 32453-32458 (2002)

Akira Takeshita 等：“孤儿核受体 SXR（类固醇和异生物质受体）在异生物质抑制 CYP3A4 机制中的推定作用”生物化学杂志 277·36（2002）。