リンパ管新生因子VEGF-Cとその受容体VEGF-R3の発現抑制による癌転移抑止

通过抑制淋巴管生成因子VEGF-C及其受体VEGF-R3的表达抑制癌症转移

• 批准号: 17016030
• 负责人: 武井 佳史
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17016030/
• 关键词: 血管内皮増殖因子-C; RNA interference; siRNA; リンパ管新生因子; 同所移植モデル; 転移

遠隔転移あるいはリンパ節転移した進行癌の治療はとても困難で、『転移』は癌による死亡の決定的要因である。腫瘍のリンパ管新生因子であるVEGF-Cとその受容体VEGF-R3に着目し、腫瘍内部において、これらの因子の発現・生合成を抑え込むRNAiシステムを構築。構築したRNAiを実際のヌードマウス癌転移モデルに応用し、in vivoレベルでの癌転移抑制を検討した。(1)ヒトVEGF-Cの発現を抑制するsiRNAを作成した。ヒトVEGF-C遺伝子のmRNAを解析し、効果が予測される10種のsiRNAを化学合成した。これらのsiRNAをVEGF-Cを高発現するヒト前立腺癌細胞(PC-3)に対して、リポフェクション法による導入を行い、VEGF-Cの発現を抑制するsiRNA塩基配列数種を決定した。蛋白レベルでの抑制効果をELISA法で、RNAレベルでの抑制効果をRT-PCR法で証明した。最もVEGF-C発現の抑制効果の高いsiRNAについてのELISA測定値は下記の如くであった。(VEGF-C siRNA,178±24pg/ml ; No treatment,4088±229pg/ml[n=4 dishes])。RNAiによって約96%のVEGF-Cを消去できた。(2)ヒトVEGF-R3の発現を抑制するsiRNAを作成した。ヒトVEGF-R3遺伝子のmRNAを解析し、RNAi効果が予測される14種のsiRNAを化学合成した。これらのSiRNAをVEGF-R3を高発現する癌細胞に導入し、有効siRNA塩基配列1種を決定した。蛋白レベルでの抑制効果をウエスタンブロット法およびELISA法で、RNAレベルでの抑制効果をRT-PCR法で検討した。(3)in vivoモデルでの癌転移抑制治療法の検討VEGF-Cを高発現するヒト胃癌細胞のリンパ行性転移株(AZL5G)をヌードマウス胃壁に同所移植したモデルを作成し、VEGF-C siRNAによる癌転移抑制効果を検討中である。siRNAとアテロコラーゲンを混合し、全身投与経路による治療を検討している。

Planning to move apart あ る い は リ ン パ festival planning move し た の cancer therapy は と て も difficult で, "planning shift" は carcinoma に よ る death の decided by で あ る. Swollen sores の リ ン パ tube new factor で あ る VEGF - C と そ の by VEGF - R3 に し, let body swollen sores internal に お い て, こ れ ら の factor の 発 now, biosynthesis を え suppression 込 む RNAi シ ス テ ム を constructs. Build し た RNAi を be interstate の ヌ ー ド マ ウ ス carcinoma planning move モ デ ル に 応 し, the in vivo レ ベ ル で の carcinoma planning shift inhibiting を beg し 検 た. (1)ヒトVEGF-C <s:1> inhibits するsiRNAを to form た. Youdaoplaceholder0 VEGF-C progeny 伝 <s:1> mRNAを analysis <s:1>, effect が pretest される10 kinds of <s:1> siRNAを chemical synthesis た た. こ れ ら の siRNA を VEGF - C を high 発 now す る ヒ ト front gland cancer cells (PC - 3) に し seaborne て, リ ポ フ ェ ク シ ョ ン method に よ る import を い, VEGF - C の 発 now を inhibit す る siRNA salt base to match the number of columns of を decided し た. Protein レ ベ ル で の unseen fruit で を ELISA method, RNA レ ベ ル で の inhibition of unseen fruit を rt-pcr method で し た. The most common inhibitor of VEGF-C shows a <s:1> inhibitory effect <s:1> high <s:1> siRNAに に に て て <e:1> <s:1> ELISA determination values are recorded below as くであった. (VEGF-C siRNA,178±24pg/ml; No treatment,4088±229pg/ml[n=4 dishes]). RNAiによって approximately 96% <s:1> VEGF-Cを is eliminated で た た. (2)ヒトVEGF-R3 is responsible for を inhibition of するsiRNAを to form た. Youdaoplaceholder0 VEGF-R3 progeny 伝 <s:1> mRNAを analysis <s:1>, RNAi effect が test される14 kinds of <s:1> siRNAを chemical synthesis た た. <s:1> れら <s:1> SiRNAをVEGF-R3を high occurrence する cancer cell に introduction, active siRNA base combination 1 を determines た. Protein レ ベ ル で の inhibition of unseen fruit を ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ ト method お よ び で ELISA method, RNA レ ベ ル で の inhibition of unseen fruit を rt-pcr method で beg し 検 た. (3) the in vivo モ デ ル で の planning shift inhibiting cancer therapy の 検 for VEGF - C を high 発 now す る ヒ ト gastric cancer cells の リ ン パ line sexual planning move plant (AZL5G) を ヌ ー ド マ ウ に ス the lining of the stomach and the transplant し た モ デ ル を make し, VEGF - C siRNA に よ る carcinoma planning shift inhibiting unseen fruit を 検 beg in で あ る. siRNAとアテロコラ とアテロコラ ゲ を を を mixed <s:1>, systemic administration and economic による therapy を検 for て て る る.

项目成果

Midkine antisense oligodeoxynucleotide inhibits renal damage induced by ischemic reperfusion

中期因子反义寡聚脱氧核苷酸抑制缺血再灌注引起的肾损伤

• 发表时间: 2005
• 期刊: Kidney International Vol.67 No.4
• 作者: Sato W;Takei Y;Yuzawa Y;Matsuo S;Kadomatsu K;Muramatsu T
• 通讯作者: Muramatsu T

Morpholino antisense oligomer targeting human midkine: Its application for cancer therapy

• DOI: 10.1002/ijc.20781
• 发表时间: 2005-04-10
• 期刊: INTERNATIONAL JOURNAL OF CANCER
• 影响因子: 6.4
• 作者: Takei, Y;Kadomatsu, K;Muramatsu, T
• 通讯作者: Muramatsu, T

In vivo delivery technique of nucleic acid compounds using atelocollagen : Its use in cancer therapeutics targeted at the heparin-binding growth factor midkine

使用去端胶原的核酸化合物体内递送技术：其在针对肝素结合生长因子中期因子的癌症治疗中的应用

• 发表时间: 2005
• 期刊: Gene Therapy and Molecular Biology Vol.9 No.B
• 作者: Takei Y;Kadomatsu K
• 通讯作者: Kadomatsu K

Antisense oligodeoxynucleotide as to the growth factor midkine suppresses neointima formation induced by balloon injury

生长因子中期因子的反义寡脱氧核苷酸抑制球囊损伤诱导的新内膜形成

• 发表时间: 2005
• 期刊: American Journal of Physiology -Heart and Circulatory Physiology Vol.288 No.5
• 作者: Hayashi K;Banno H;Kadomatsu K;Takei Y;Komori K;Muramatsu T
• 通讯作者: Muramatsu T

Growth factor midkine is involved in the pathogenesis of diabetic nephropathy

• DOI: 10.2353/ajpath.2006.050488
• 发表时间: 2006-01-01
• 期刊: AMERICAN JOURNAL OF PATHOLOGY
• 影响因子: 6
• 作者: Kosugi, T;Yuzawa, Y;Kadomatsu, K
• 通讯作者: Kadomatsu, K