ヘパリン結合性成長因子ミッドカインの活性抑制とその医学的応用

肝素结合生长因子中期因子活性的抑制及其医学应用

• 批准号: 00J04272
• 负责人: 武井 佳史
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J04272/
• 关键词: ミッドカイン; ヘパリン結合性成長因子; アンチセンス; 癌; 治療; ヌードマウス; 遺伝子導入

ヒト・ミッドカイン合成を抑制するアンチセンス・オリゴの作製と癌治療への応用に関する研究ヘパリン結合性成長因子ミッドカイン(Midkine, MK)は細胞をトランスフォームし、線溶系の亢進や血管新生作用を有することから、MKが癌の発生や進展に関与していると考えられた。そこでMK活性を阻害するアンチセンス・オリゴを作製し、これを用いた癌治療への応用性を検討した。マウスMKに対するアンチセンス・オリゴについては、すでに論文発表(Y.Takei et al. Cancer Res. 61,8486-8491:2001)済みなので今回、ヒトMKの合成を阻害する新規アンチセンス・オリゴ(ホスホロチオエート骨格およびモルフォリノ骨格を有する2種)の開発を行い、以下に示すような知見を得た。(1)すでにマウスMK合成を阻害可能なアンチセンスDNAの開発に成功しているので、マウスMKにおける標的部位を参考にして、ヒトMK合成を阻害可能なホスホロチオエート型アンチセンスDNA(MK AS-h01)を合成した。合成したオリゴDNAをMKを培養上清中に分泌しているヒト前立腺癌細胞(PC-3)に投与した。遺伝子導入剤として陽イオン性リポソーム試薬、リポフェクトアミン-プラスを用いた。その結果、MK AS-h01投与によってPC-3のMK合成が有意に抑制されることが明らかとなった。センス配列を有するコントロールは効果がなかった。(2)昨年度から開発を行ってきたMK Morpholino ASをPC-3細胞に投与すると、同細胞のMK合成量が減少し、かつin vitroにおける同細胞の増殖能力も減少することが明らかとなった。PC-3をヌードマウス皮下に移植して作成した腫瘍に、MK Morpholino ASを注入すると腫瘍の増大が有意に抑制された。MKを分子標的とした新たな癌治療法の可能性を明示する結果と考えられた。

Study on the role of binding growth factor Midkine (MK) in inhibiting cell growth, enhancing cytokinesis, and angiogenesis in cancer development and progression. The activity of MK is inhibited by the activity of MK, and the activity of MK in cancer treatment is discussed. A paper on MK synthesis was published (Y.Takei et al. Cancer Res. 61, 8486 -8491:2001). (1)The synthesis of MK is inhibited by the inhibition of MK synthesis. The development of MK DNA is successful. The target site of MK synthesis is referenced. The synthesis of MK synthesis is inhibited by the inhibition of MK synthesis. The synthesis of MK DNA(MKAS-h01) is successful. DNA synthesis in MK culture supernatant was secreted in PC-3 cells. The introduction of the gene into the system is called "gene selection". As a result, MK AS-h01 was injected into PC-3 and MK synthesis was intentionally inhibited. The results of the study were as follows: (2)The development of MK Morpholino AS in PC-3 cells decreased the amount of MK synthesis in the same cell and the ability to proliferate in the same cell. PC-3 was implanted subcutaneously, and MK Morpholino AS was injected into the tumor. These results demonstrate the possibility of MK as a molecular target and new cancer treatments.

项目成果

Yoshifumi Takei et al.: "5'-,3'-Inverted thymidine-modified antisense oligodeoxynucleotide targeting midkine : its design and application for cancer therapy"Journal of Biological Chemistry. 277. 23800-23806 (2002)

Yoshifumi Takei等人：“5-,3-反向胸苷修饰反义寡脱氧核苷酸靶向中期因子：其设计和癌症治疗应用”生物化学杂志。

Onrai Matsuura et al.: "Midkine expression is associated with postnatal development of the lung"Cell Structure and Function. 27. 109-115 (2002)

Onrai Matsuura 等人：“中期因子表达与肺的出生后发育有关”细胞结构和功能。

Yukio Sumi, et al.: "Midkine, a heparin-bindhig growth factor, promotes growth and glycosaniinoglycan synthesis of endothelial cells through its action on smooth muscle cells in an artificial blood vessel"Journal of Cell Science. 115. 2659-2667 (2002)

Yukio Sumi 等人：“Midkine 是一种肝素结合生长因子，通过作用于人造血管中的平滑肌细胞，促进内皮细胞的生长和糖胺聚糖合成”《细胞科学杂志》。