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生体における組織特異的選択的スプライシング制御機構の解明

阐明活体组织特异性选择性剪接控制机制

基本信息

批准号：
17017016
负责人：
黒柳秀人
金额：
$ 3.2万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

線虫の相互排他的エクソンの発現をモニターするためのミニ・ジーンを作製した。このミニ・ジーンを普遍的発現プロモータで全身に発現させたところ、それぞれの組織はどちらかあるいは双方を発現していた。各種の組織特異的プロモータを用いて同じミニ・ジーンを発現させたところ、普遍的プロモータのときと同様、筋肉系はエクソン5A、神経系・上皮系はエクソン5Bという組織特異的エクソン選択性の違いが確認され、組織特異性を示すことが判明した。組織特異性を示すために必要なシス・エレメントを同定するために、エクソン領域の欠失や点変異の導入を行い、エクソン5B上の配列がエクソン5Bの選択に必要でないこと、一方イントロン4上のGCAUGを含む配列がエクソン5Aを選択するために必要であることが明らかとなり、このレポーター系によってシス・エレメントを探索できることが示された。組織特異性を制御するトランスの因子を探索するために、体壁筋特異的myo-3プロモータ制御下でエクソン5A-RFPを優勢に発現するレポーター線虫にEMSで突然変異を誘導し、GFPの発現が強まることを指標に、ワーム・ソーターを使用して、体壁筋におけるエクソン選択性が変化する変異体の単離を試みた。その結果、およそ5万ゲノムのスクリーニングにより約30株の独立の変異体が得られた。これらの変異体の表現型の分類、染色体マッピングおよび相補性試験の結果、少なくとも4つの遺伝子座が存在することが判明した。得られた変異体について、snip-SNPs法によるマッピングを進めて、これまでに3つの遺伝子座について遺伝子を同定した。うち1つは新規のRNA結合タンパク質をコードし、alternative-splicing-defective-1(asd-1)と命名した。asd-1が線虫の他の既知のRNA結合タンパク質の1つと高い配列相同性を有していることから、これらの二重変異体を作製したところ、体壁筋におけるレポーターの発現は完全にエクソン5B優位となることがわかった。また、これらのRNA結合タンパク質はイントロン4上に見出されたシス・エレメントに試験管内で特異的に結合することも確認された。さらに、二重変異体では、内在性の遺伝子のエクソン選択性もレポーター同様にエクソン5B優位に変化していることが見出された。これらのことから、ASD-1とそのファミリーのRNA結合タンパク質が協調してレポーターおよび内在性遺伝子の相互排他的エクソンの選択性を制御していることが確認された。以上の結果から、レポーターによる選択的スプライシングの選択性のモニター線虫により、選択性の制御機構を解析できることが示された。

The development of mutually exclusive solutions for linear insects is controlled by the development of mutually exclusive solutions. This is a common occurrence in the whole body. Various tissue-specific proteins were identified by using the same gene expression system, universal protein expression system, muscle system, nervous system, epithelial system, and tissue-specific protein expression system. Tissue-specific expression is required to identify the missing points in the solution field and to introduce them into the solution field. The arrangement on the solution 5B is required for the selection of the solution 5B. The GCAUG on the solution 4 is required for the selection of the solution 5A. This is the first time that I've seen this. Tissue-specific control factors were explored. Tissue-specific myo-3 protein was used to control the expression of 5A-RFP. Tissue-specific myo-3 protein was used to control the expression of 5A-RFP. Tissue-specific myo-3 protein was used to control the expression of 5A-RFP. As a result, about 50,000 plants were obtained from the plant. The classification of the phenotype of the variant, the results of the complementary test of the chromosome, and the existence of the chromosome locus were identified. The method of snip-SNPs is used to determine the sequence of genes.うち1つは新规のRNA结合タンパク质をコードし、alternative-splicing-defective-1(asd-1)と命名した。Asd-1 and other well-known RNA binding proteins have high alignment identity, high alignment identity, and double alignment. The development of body wall tendons has high alignment identity. The RNA binding protein was identified on the 4 th day of the assay. In addition, the two types of heterosexual, intrinsic, and heterosexual are different from each other. ASD-1 is a unique RNA binding protein that is compatible with and exclusive to intrinsic proteins. The above results show that the selection and control mechanism of the selection and control mechanism of the selection are analyzed.