網膜軸索路形成に及ぼすコンドロイチン硫酸の構造多様性の効果

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MO-225モノクローナル抗体によって認識されるコンドロイチン硫酸(CSs)は(1)網膜軸索路形成期のニワトリ胚において網膜軸索路を取り囲むneuropilに高密度で存在するとともに、(2)視索の深層で網膜軸索路を取り囲むMO-225陽性のneuropilに接して走行する網膜軸索の細胞膜外表面に提示されていた。これらの結果はMO-225によって認識される特定の構造を有するCSは網膜軸索路の境界の規定に関わるとともに、視索の内部に認められる発生段階に依存した網膜軸索の層状の走行(chronological sorting;初期に走行する軸索は視索の深層を、後期に走行する軸索は視索の浅層を走行する)に関わることを示唆した。MO-225の認識するCSの構造を詳しく解析するために、AからEユニットをそれぞれ濃縮したCS標品の脂質誘導体(CSs-PE)を疎水的に吸着させたポリスチレンビーズ(CSビーズ)を作成した。CSビーズのフローサイトメトリーを行い、MO-225の抗原特異性を検討したところ、D,E,およびCユニットを豊富に含むCSビーズに高い親和性を示した。以上の結果はD,E,またはCユニットを含むCSsが網膜軸索路形成とchronological sortingに関わることを示唆している。MO-225によって認識されるCSsの網膜軸索路形成における機能を調べるために、MO-225陽性CSの時間的空間的分布を胚において操作することを試みている。DユニットCSの生成に深く関わる酵素、ヒトUronyl 2 sulfotransferase(UST) cDNAを入手し、UST-IRES-GFP vectorを作成した。その他の酵素についても同様のvectorを作成中である。現在、ニワトリ胚へ電気穿孔法によって導入を行いつつある。