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固体NMR分光法による生体膜表面における細胞内情報伝達系蛋白質の動的構造の解析

利用固态核磁共振波谱分析生物膜表面细胞内信号转导蛋白的动态结构

基本信息

批准号：
17048029
负责人：
辻暁
金额：
$ 4.16万
依托单位：
University of Hyogo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

細胎内情報伝達系に含まれる膜表在性蛋白質、ホスホリパーゼC-δ61(PLC-δ1)の脂質膜結合ドメインであるPHドメインについて、脂質二重膜の脂質組成、膜構造等の変化に対応するPLC-σ1の構造変化を、固体NMR分光法とベシクル共沈殿法を用いて解析した。脂質二重膜ベシクル中に、中性脂質であるホスファチジルコリン(PC)とともに、酸性脂質(ホスファチジルセリン(PS))が20%共存しているとき、PSを含まない脂質膜表面で誘起されるPHドメインの立体構造変化が抑制されることが見いだされた。また、ベシクル共沈澱法によりPHドメインと脂質膜中の結合基質、ホスファチジルイノシトール4,5-二リン酸(PIP2)の解離定数を評価したところ、PSの共存により解離定数の増加が見いだされた。これらの事より、脂質膜上でPLC-σI PHドメインのβ5/β6ループに含まれる両親媒性α-ヘリッックスと中性脂質膜表面との相互作用により誘起される構造変化が、PIP2特異的結合サイトを介した膜結合とは異なる補助的な脂質膜結合機構としてPH-ドメイン-脂質膜間の結合親和性に寄与しており、脂質膜組成に依存してPHドメイン-PIP2間の結合能を変化させる調節機構として機能することが示唆された。また、両親媒性α-ヘリックスと中性脂質膜表面との相互作用による構造変化は、脂質二重膜構造を持つMLV、SUV表面では生じるが、PHドメインがドデシルホスホコリン中にPIP2を可溶化したミセルに結合した際には見いだされず、構造変化の誘起に脂質二重膜界面が不可欠な役割を果たしていることが明らかになった。

The in-fetus information report is based on the analysis of the characteristics of membrane surface proteins, lipid membranes, PH membranes, double membranes, PLC- σ 1, solid NMR spectrophotometry, solid NMR spectrophotometry, and so on. Double membranes, neutral lipids, neutral lipids, acid lipids (PC), acid lipids (PS) coexist at 20%, and PS contains lipid membranes. The surface of the lipid membranes is covered with PH membranes and stereoscopified to inhibit the formation of sterification. The method of co-precipitation was used to determine the number of dissociated compounds (PIP2), the number of dissociated compounds (PIP2), the number of dissociated compounds (PS), the number of dissociated compounds, and the number of compounds in the lipid membrane. In this paper, the interaction between the surface of the neutral lipid membrane and the membrane surface of the neutral lipid membrane is studied, and the interaction between the membrane surface of the neutral lipid membrane is caused by the interaction between PLC- σ I and β 5