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局所阻害法による鞭毛屈曲運動形成機構の解明

利用局部抑制法阐明鞭毛弯曲运动的形成机制

基本信息

批准号：
17049012
负责人：
奥野誠
金额：
$ 2.62万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

蛍光色素PRODAN処理をした細胞膜除去ウニ精子鞭毛にUVを照射し(PRODAN-UV)、鞭毛屈曲運動の局所阻害を引き起こすことに成功したが、阻害のメカニズムについては不明であり、それを明らかにすることが本年度の目的の一つであった。細胞膜除去したウニ精子鞭毛をトリプシン処理すると、微小管が滑り出してくるが、PRODAN-UV処理をしたものでは起こらなかった。また、細胞膜除去鞭毛について、ほぼ運動が停止するPRODAN-UV処理を行った後、ATPase活性を測定したところ、ほとんど変化がなかった。これら二つの結果から、鞭毛軸糸中においてダイニン分子は微小管の間に架橋を形成するが、酵素機能は失われていないことが推測される。ダイニン分子がどのような状態になるのか、単離したダイニンによって調べる必要がある。また、PRODAN-UV処理後の軸糸タンパク質をSDS電気泳動して調べたが、一次元、二次元共に明らかな差は検出できなかった。この結果は、ダイニン分子がPRODAN-UV処理によって壊裂を引き起こすようなことはないことを示唆している。これらについてもダイニン腕複合体を単離して調べる必要が有る。ウニ精子より複雑な構造をもつ哺乳類精子において細胞膜のある状態でPRODAN-UV処理実験を行った。マウス精子を用いた実験では、ミトコンドリアのある中片部では阻害作用が主部より低いことが観察された。また、鞭毛全体をPRODAN-UVで阻害しても、屈曲波伝播において中片部と主部では反応が異なった。さらにcccpでミトコンドリア活性を阻害すると、興味深いことにPRODAN-UV処理に対する耐性が上昇した。これらの結果は、PRODAN-UV処理が代謝を含めた鞭毛運動維持機構の解析に有効であることを示唆している。マウス精子での細胞膜除去-運動再活性化はかなり困難であるが、それを行い、比較していく予定である。

Prodan treatment is successful in removing the cell membrane from the sperm flagella by UV irradiation (PRODAN-UV) and inhibiting flagella flexion. The cell membrane is removed from the sperm and the microtubule is removed from the sperm. After removal of flagella from cell membrane and cessation of ATPase activity by PRODAN-UV treatment, ATPase activity was measured. The result of this is that the flagellum axis is in the middle of the molecule, and the bridge between the microtubes is formed. The enzyme function is lost. The number of people who are in the middle of the game is not enough. After PRODAN-UV treatment, the axis of SDS electrophoresis is modulated, and the first and second dimensional components are modulated. The result is that the molecules are treated with PRODAN-UV. This is the first time I've ever seen you. The structure of mammalian sperm cells and the state of cell membrane are treated with PRODAN-UV. The sperm is used in the middle part of the body, and the middle part is used in the middle part. The whole flagella is PRODAN-UV, the bending wave is transmitted, the middle part is transmitted, the main part is transmitted, and the difference is transmitted. The resistance to CCCP and PRODAN-UV treatment increased. The results showed that PRODAN-UV treatment was effective in the analysis of flagellum movement maintenance mechanism. Sperm membrane removal-motor reactivation-difficult to perform, compared to predetermined