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FA架橋によるヒストンH3及びH4テール依存的クロモネマファイバー構造の検出

通过 FA 交联检测组蛋白 H3 和 H4 尾部依赖性染色体纤维结构

基本信息

批准号：
17050032
负责人：
須賀則之
金额：
$ 3.84万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

フォルムアルデヒド(FA)によるin vivoクロモネマファイバーの維持とそのヒストンテール依存性の解析を行った。まず、in vivoのクロマチン構造であり、ヌクレオソームよりも高次の構造であるクロモネマファイバー構造の生化学的な検出をFA架橋により試みた。FA架橋の効果をクロマチンのリンカーDNAを切断するMNase(マイクロコッカルヌクレアーゼ)感受性を指標に解析した。細胞に対して、FAを0.25%から5%濃度で作用させた後、MNaseによるクロマチンリンカーDNAの切断を行った。その結果、濃度依存的に、MNaseに対する感受性の低下が全クロマチンDNAで観察された。また、PCRにより特定のクロマチン領域においても1.5%FA架橋により同様な結果が得られた。これらの結果から、FA架橋がクロマチン構造を固定していることが示唆された(昨年度研究実績)。そこで、このFA架橋によるクロマチン構造の維持がヒストンテールに依存しているかを、ヒストンテール欠損細胞を用いて調べた。その結果、テール欠損により、FA維持された構造を示すMNase感受性の低下が抑えられた。つまり、FAにより維持されたin vivoのクロマチン構造がヒストンテールに依存したものである事が理解される。さらに、この方法が出芽酵母のテロメアの高次構造を検出できるか調べた。テロメアにおいても、FA維持された構造を示すMNase感受性の低下が検出された。さらに、この感受性の低下が、テロメアの構造を構築するSIR複合体に依存した。この結果より、FA架橋がin vivoのクロマチン構造、クロモネマファイバーを維持する事が確認される。

The analysis of the survival of the virus in vivo In vivo, the structure of the FA bridge is detected. FA bridging effect analysis of MNase susceptibility Cell cycle, FA 0.25%~ 5% concentration, MNase, DNA cleavage The results were concentration-dependent, and the sensitivity of MNase to DNA was reduced. The results of PCR were similar to those of the 1.5% FA bridge. The results show that FA bridge structure is stable and stable (last year's research results). The maintenance of FA bridge structure depends on the use of FA bridge. As a result, the structure of the system shows that MNase sensitivity is low. The FA is maintained in vivo, and the structure is maintained in vivo. This method is used to detect the higher-order structure of budding yeast. The low sensitivity of MNase was shown by the structure of FA and FA. The structure of the SIR complex depends on the low sensitivity and low sensitivity. The result is that FA bridging is in vivo, and it is confirmed that FA bridging is in vivo.