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損傷乗り越え合成の制御と癌化への影響

损伤克服合成的控制及其对癌化的影响

基本信息

批准号：
18012039
负责人：
渡邊健司
金额：
$ 6.85万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒトRAD6B・RAD18タンパク複合体を精製し、フォーク型および長い1本鎖DNAに結合する性質をもつことを示した。このDNAへの結合には、RAD18のSAPドメインが必要であった。SAPドメインに変異を導入したRAD18タンパクは、DNAへの結合強度が著しく低下し、DNA傷害に応答しておこるDNA複製停止部位への集積がみられなかった。また、この変異RAD18タンパクは、RAD18欠損細胞のUV感受性を回復させる活性も失われていたことから、ヒトRAD6B・RAD18タンパク複合体は、フォーク型または長い1本鎖DNA構造を認識して結合することにより、停止した複製フォークに集積し、複製後修復を推進すると結論した。この研究成果は、複製後修復でRAD6B・RAD18タンパク複合体が停止した複製フォークのセンサーであることを示しており、発がん防御の戦略を立てるための重要な知見を供給した。さらに、個体レベルでのRAD18遺伝子の役割を明らかにするため、RAD18遺伝子ノックアウトマウスを作成し、その表現型を調べた。RAD18欠損マウスはほぼ正常に生まれ、成長した。雄マウスの生殖能は2カ月齢では正常であったが、加齢とともに低下した。加齢により精巣重量が低下し、精細管内の生殖細胞が欠失した。またRAD18欠損マウスの精巣での生殖細胞幹細胞の増殖と分化をサポートする能力は正常であった。特に精原細胞のみを欠失した精細管が多くみられた結果から、RAD18遺伝子は、生殖幹細胞の維持に必要であることが示唆された。本研究により、再生医学の実施という観点から重要である幹細胞の維持機構を理解するための知見が得られた。

Rad6B·RAD18 complex is refined, and the properties of DNA binding are shown. This DNA binding is required for RAD18 and SAP. SAP-induced DNA replication was detected by RAD18, DNA binding strength was decreased, DNA damage was detected, and DNA replication stop sites were accumulated. The UV-sensitive recovery of RAD18 deficient cells was observed in vitro. The results showed that RAD6B and RAD18 deficient cells were recovered from UV-sensitive complex. The DNA structure of RAD18 deficient cells was identified from UV-sensitive complex. The results of this research provide important insights into the repair of RAD6B·RAD18 complex after replication. The RAD18 gene expression profile was modulated by the gene expression pattern of RAD18. RAD18 is short of damage, and it is normal to grow and develop. Male reproduction is normal. In addition, the sperm weight is low, and the germ cells in the sperm tubules are missing. The ability of germ cell stem cells to proliferate and differentiate is normal. In particular, spermatogonia is a complex process that involves the maintenance of germ cells, such as RAD18. This study is important for understanding the maintenance mechanism of stem cells in regenerative medicine.