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ERK-MAP キナーゼの細胞内局在制御と細胞運動

ERK-MAP 激酶亚细胞定位和细胞运动的控制

基本信息

批准号：
18013040
负责人：
谷村進
金额：
$ 6.59万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18013040/
关键词：
ERK-MAPキナーゼシグナル伝達細胞運動がん癌

项目摘要

1.p30発現量によってERK-MAPキナーゼの細胞内局在及び細胞運動能が変化するp30をMKN1細胞に発現させると、血清刺激に依存したERK-MAPキナーゼの核内集積が抑制された。一方、siRNA処理によってp30の発現を抑制した際には、血清刺激によるERK-MAPキナーゼの核内移行/集積が促進された。また、Boyden chamber法を用いて細胞の運動能を比較検討したところ、p30を過剰発現した際には細胞運動が抑制され、逆にp30の発現を抑制した際には細胞運動が亢進された。2.p30/p120複合体はp30のSer^<202>のリン酸化により解離するp30各種欠失変異体、及び部位特異的変異体を作成してp30リン酸化部位、及びリン酸化酵素の特定を試みたところ、p30はSer^<202>がp90^<rsk>によってリン酸化されることを見出した。また、p30/p120複合体は血清刺激によって解離するが、それはMEK阻害剤によって抑制されること、さらにSer^<202>をAlaに置換したS202A変異体はp120から解離しないことから、p30/pl20複合体はp90^<rsk>によるp30のSer^<202>リン酸化によって制御されることが明らかとなった。3.p120は血清刺激によって速やかに細胞周縁部位に移動する特異的抗体による細胞免疫染色法、あるいはEGFP fusion p30及びp120を用いて、各分子の細胞内局在変化を観察した。その結果、血清飢餓状態ではp30は細胞全体にわたって局在していたが、p120は核周辺部位に点在していた。一方、細胞を血清で刺激した場合にはp120は刺激後速やかに細胞周縁部位のリーディングエッジと考えられる部位に移動するが、それはp30のS202A変異体を発現させると抑制されることが明らかとなった。

1. p30 expression is dependent on ERK-MAP expression in MKN1 cells and on inhibition of ERK-MAP expression in MKN1 cells. The expression of p30 was inhibited by siRNA treatment, and the migration/accumulation of ERK-MAP was promoted by serum stimulation. The Boyden chamber method was used to compare cell motility with the inhibition of cell motility when p30 was detected. 2. The p30/p120 complex is characterized by p30 Ser <202>^, p90 ^and p30 Ser^, p30 Ser <202>^, p90 ^and p30 Ser ^<rsk>. The p30/p120 complex was dissociated from the serum and inhibited by MEK inhibition. The <202>p30/p120 complex was dissociated from the serum and inhibited by Ser ^Ala <rsk>substitution<202>. 3. p120 is stimulated by serum, and specific antibodies are used to detect the intracellular changes of each molecule. The results, serum starvation state, p30, whole cell, p120, nuclear peripheral site A side, A side.