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ポリペプチド合成酵素を用いた抗がん剤ライブラリーの構築

利用多肽合酶构建抗癌药物库

基本信息

批准号：
18032004
负责人：
及川英秋
金额：
$ 3.46万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18032004/
关键词：
生理活性酵素反応微生物生合成有機化学

项目摘要

非リボソーム依存性ポリペプチド合成酵素(NRPS)を用いたコンビナトリアル合成の可能性を検証するため、こうして生合成上機能別に仕分けされた遺伝子を持つ発現プラスミドを用いて、遺伝子工学的手法によりどの程度本来の生成物の構造を改変できるか検討した。今回行なった操作は、1)遺伝子の除去;2)変異導入による特定の機能の失活;3)本来の組み合わせでない相同的なNRPS遺伝子の導入であり、いずれも予想に合致する構造を持つ生成物が得られた。1),2)に関しては常法に従い、所定の結果が得られた。操作3)ではまずechinomycinとのハイブリッド化合物の合成を目指して、構造の類似したSW-163生合成遺伝子クラスターの取得を検討した。同時に不明であったSW-163の絶対配置の決定も行なった。その結果、アミノ酸配列レベルでechinomycin NRPSと高い相同性を示す2種のNRPS(swb16,swb17)を同定することができた。次いで新たに得られたNRPS遺伝子(swb17)と同等な機能を有するecm7を入れ換えたプラスミドを構築し、このNRPS遺伝子を搭載したプラスミドを既に導入したものと入れ換えた大腸菌を調製した。本大腸菌ではシクロプロパンアミノ酸供給系が存在しないため、合成したnorcoronamicacidを培地に添加して培養したところ、予想した分子量を持つハイブリッド化合物を確認することができた。これは異なる物質を生産するNRPSを組み合わせて骨格を構築できた最初の例である。

Non-dependent protein synthase (NRPS) is used to demonstrate the possibility of protein synthesis, and to investigate changes in the structure of natural products in gene engineering methods. The current operation is to: 1) remove the gene;2) deactivate the specific function of the different introduction;3) introduce the same NRPS gene into the original combination;3) maintain the product of the original combination. 1), 2) the relationship between the normal law and the results determined by the law. Operation 3) To investigate the synthesis of echinomycin and its derivatives, and to investigate the synthesis of derivatives similar to SW-163. At the same time, the SW-163 is unknown and the configuration is determined. The results show that the two NRPS(swb16,swb17) are identical. Second, the NRPS gene (swb17) and the equivalent function have been introduced into the system. The presence of norcoronicacid in Escherichia coli and its synthesis are confirmed by culture and molecular weight determination. The first example of this is the combination of NRPS and the structure of the structure.

项目成果

期刊论文数量（6）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Identification and Stereochemical Assignment of the -Hydroxytryptophan Intermediate in the Echinomycin Biosynthetic Pathway

棘霉素生物合成途径中β-羟基色氨酸中间体的鉴定和立体化学归属

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Org. Lett. 8(21)
影响因子：
0
作者：
Koketsu;K.
通讯作者：
K.

Total biosynthesis of antitumor nonribosomal peptides in Escherichia coli

DOI：
10.1038/nchembio803
发表时间：
2006-08-01
期刊：
NATURE CHEMICAL BIOLOGY
影响因子：
14.8
作者：
Watanabe, Kenji;Hotta, Kinya;Oikawa, Hideaki
通讯作者：
Oikawa, Hideaki

Improved Production of Triostin A in Engineered Escherichia coli with Furnished Quinoxaline Chromophore by Design of Experiments in Small‐Scale Culture

DOI：
10.1021/bp070298y
发表时间：
2008
期刊：
Biotechnology Progress
影响因子：
2.9
作者：
Alex P Praseuth;Mike B. Praseuth;H. Oguri;H. Oikawa;Kenji Watanabe;Clay C. C. Wang-Clay-C.-C.-Wang-152744828
通讯作者：
Alex P Praseuth;Mike B. Praseuth;H. Oguri;H. Oikawa;Kenji Watanabe;Clay C. C. Wang-Clay-C.-C.-Wang-152744828

Robust platform for de novo production of heterologous polyketides and nonribosomal peptides in Escherichia coli.

用于在大肠杆菌中从头生产异源聚酮化合物和非核糖体肽的强大平台。