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デジタル精密計測のためのmRNAの高感度解析技術

用于数字精密测量的高灵敏度 mRNA 分析技术

基本信息

批准号：
18038012
负责人：
蒲池利章
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18038012/
关键词：
mRNA GCクランプ RNA-DNA2本鎖

项目摘要

近年、遺伝子やタンパク質が生体内でどのような働きをしているかということに注目が集まっている。その中で、これら遺伝子やタンパク質の細胞内での働きを知るために、タンパク質や代謝産物などの網羅的解析技術の開発が望まれている。本研究では、細胞内全mRNAの網羅的な解析が可能な分離法の開発を行う。さらに、分離したmRNAの高感度塩基配列決定法についても検討した。本年度は2次元電気泳動によるmRNAの分離方法を確立するために、以下のような研究を行った。本研究では1次元目に通常の電気泳動を行い、分子量に基づく分離をおこない、2次元目として温度勾配電気泳動法2次元電気泳動をおこなった。mRNAから逆転写酵素により相補鎖DNAを合成する際に特殊なプライマーを用いることにより、GCクランプの付加したRNA-DNA2本鎖の合成を行った。まず、細胞から抽出したmRNAを鋳型に逆転写酵素を用いて相補鎖のDNAを合成した。このDNA合成に用いるプライマーとしては、一般的にmRNAのポリA鎖に対する相補鎖であるポリT鎖を用いた。本研究ではさらにGCクランプを分子内にもち、さらに分子内でヘアセン構造を形成するプライマーを用いた。つぎに、このプライマーを用いて合成したmRNAの相補鎖とmRNAをDNAとRNAに作用するリガーゼを用いて結合する(ライゲーション)。次に作成したRNA-DNA複合体を用いて温度勾配電気泳動を行い、最適分離条件についての検討を行った。これらの検討を行うことにより、目的とするmRNAの分離方法が確立できた。

In recent years, there has been a great deal of interest in the development of biological systems. The development of analytical techniques for the determination of intracellular metabolites in the medium and the medium is expected. In this study, the analysis of total mRNA trapping in cells and the development of isolation methods were discussed. The high sensitivity gene alignment determination method for mRNA isolation was developed. This year, we have established a method for the isolation of mRNA from 2-D electromigration. In this study, the usual electrokinetic behavior, molecular weight, molecular weight, mRNA reverse transcription enzymes complement DNA synthesis in the context of special transcription enzymes The expression of mRNA in the cell was determined by reverse transcription enzymes, which were used to complement DNA synthesis. This DNA synthesis is based on DNA sequencing. In this study, the molecular structure of GC molecules was formed and used. In addition, the gene expression of mRNA and RNA can be synthesized by DNA and RNA. The RNA-DNA complex was prepared by temperature regulation and migration, and the optimal separation conditions were discussed. The method of mRNA isolation was established.