1細胞蛍光検出技術を用いたがん特異的免疫細胞の遺伝子スクリーニング法の開発

利用单细胞荧光检测技术开发癌症特异性免疫细胞的基因筛查方法

• 批准号: 18038049
• 负责人: 秋山 靖人
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Shizuoka Cancer Center Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18038049/
• 关键词: 1細胞蛍光検出; 免疫細胞; 遺伝子スクリーニング

本研究では、静岡がんセンターにおいて樹状細胞によるワクチン投与を受けた転移性メラノーマ患者よりえあれたTおよびB細胞からのがん特異的抗体、及び特異的T細胞リセプター遺伝子のスクリーニングを行なうため、1細胞レベルでの細胞分離が可能なアレイ、標的細胞の検出、1細胞からのmRNA抽出技術を開発することを目的とする。CTL細胞に関しては、HLA拘束性のMART、gp100ペプチド及びA24拘束性MAGE1、MAGE3ペプチドにそれぞれ特異的なテトラマー試薬を用いて、ペプチドの特異的なCLT lineを数種類樹立し、発言するT細胞リセプター遺伝子のクローニングに成功している。(特許出願済)。この中で、メラノーマ患者のgp100 A2ペプチドに特異的なCLT lineを使用して、CD8+/gp100 A2 tetramer+画分の細胞をsortingした。東京農工大のグループが開発したセルチップを用いて蛍光標識されたCTL細胞を1細胞レベルで検出することが可能となった。セルピッカーを使用して1個のCTL細胞を採取し、total RNAの抽出・cDNA化後、特定のTCRレパトワ特異的なプライマーおよびGAPHDプライマーを使用してPCR増幅を行なった。採取した5個のTCL細胞のうち3個で特異的なTCR遺伝子が効率的に増幅された。一方、GAPHD遺伝子は、全細胞において増幅が確認された。増幅された特異的なTCR遺伝子産物を切り出し、クローニングを施行し、最終的なgp100ペプチド特異的なTCR遺伝子配列を得ることができた。またB細胞においてもEB virusにより不死化したB細胞株についてHLA-A24拘束性MAGE1ペプチドに特異的な細胞を同定することが可能となり、今後セルチップを用いてCTLと同様のアプローチによりペプチド特異的な抗体遺伝子のクローニングを行なう予定である。

In this study, T cells, B cells, T cells, T cells, B cells, T cells, cells and cells. 1. The mRNA extraction technology is used for the purpose of improving the performance of the computer. CTL, HLA, gp100, and A24 MAGE1, MAGE3, CLT line, CLT line, and so on, have been successfully tested. (special permission is granted). The CLT line of the patient gp100 A2 was used, and CD8+/gp100 A2 tetramer+ was used to draw the score of cell sorting. The Beijing Polytechnic University of Technology is using the optical label to identify the number of CTL cells that may be affected. After using 1 CTL cell to fetch, total RNA to extract the cDNA, and the specific TCR cell to extract the GAPHD data, the PCR frame is used to extract the data. Take the amplitude of the rate of 5 TCL cells and 3 special TCR cells. One party, GAPHD cell phone, full cell phone, confirm the size of the phone. The TCR sub-object of the special device is cut out, and the TCR sub-column of the most popular gp100 is added to the list of special items. In the future, we may use the antibody antibody of the HLA-A24 binding MAGE1 cell line to predict the possibility of immortalization. In the future, we will use the antibody antibody of the CTL cell line to determine the antibody level of the cell line.

项目成果

一細胞定量解析の最前線-ライフサーベイヤ構築に向けて-(シーエムシー出版)

单细胞定量分析最前沿——迈向生命测量师的构建——（CMC出版）

• 发表时间: 2006
• 作者: 竹山春子;松永 是
• 通讯作者: 松永 是

Detection of Cryptosporidium parvum oosysts using a microfluidic device equipped with the SUS micromesh and FITC-labeled antibody

使用配备 SUS 微网和 FITC 标记抗体的微流体装置检测微小隐孢子虫卵囊

• 发表时间: 2007
• 期刊: Biotechnol Bioeng 96
• 作者: Taguchi T;Arakaki A;Takeyama H;Haraguchi S;Yoshino M;Kaneko M;Ishimori Y;Matsunaga T
• 通讯作者: Matsunaga T

T細胞レセプターβ鎖遺伝子

T细胞受体β链基因

• 发表时间: 2007

Surface functionalization of inorganic nano-crystals with fibronectin and E-cadherin chimera synergistically accelerates trans-gene delivery into embryonic stem cells

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2006.09.081
• 发表时间: 2006-11-24
• 期刊: BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS
• 影响因子: 3.1
• 作者: Kutsuzawa, K.;Chowdhury, E. H.;Akaike, T.
• 通讯作者: Akaike, T.

Proteomic analysis of a highly metastatic gastric cancer cell line using two-dimensional differential gel electrophoresis

使用二维差异凝胶电泳对高度转移性胃癌细胞系进行蛋白质组学分析

• 发表时间: 2006
• 期刊: Oncology Reports 16
• 作者: T.Taguchi;A.Arakaki;H.Takeyama;S.Haraguchi;M.Yoshino;M.Kaneko;Y.Ishimori;T.Matsunaga;K.Kutsuzawa;M.Takikawa
• 通讯作者: M.Takikawa