人工細胞モデル構築のためのRNA転写後修飾複合体装置の試験管内再構成

用于构建人工细胞模型的RNA转录后修饰复杂装置的体外重建

• 批准号: 18048032
• 负责人: 堀 弘幸
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18048032/
• 关键词: 核酸; 酵素; 生体分子; ゲノム; 進化

生体内で、RNAが生理作用を発揮するためには、RNA修飾、スプライシング、プロセシングといった様々な編集・加工の工程(転写後修飾)を経る必要があります。転写後修飾は、様々なタンパク質が経時的に前駆体RNAにアッセンブリし、作用することにより起こります。本申請は、この転写後修飾装置を試験管内で再構成し、その基本システムを解明することを目標としました。(1)TrmH-AdoMet-tRNA三者複合体を調製するため、TrmHの認識部位の部がデオキシ体となったキメラRNA-DNA核酸を合成した。これらのうち、いくつかは触媒反応の進行をくい止める効果があり、反応中間体に近い複合体形成に成功した。この成果を受け、平成19年度はX線結晶構造解析に着手し、結晶化条件をいくつか見いだした。(2)この複合体を用いて、ハイドロキシラジカルプロービングをおこない、TrmHのC末端(tRNAI選択部位)と接触する部位がtRNAの三次元コア内部にあることを見いだし報告した。(3)Aquifex aeolicus由来TrmBのC末端構造が二量体インターフェースの一部であることを確認し、高温環境下でのタンパク質構造の安定性およびメチル基転移部位の選択性に寄与することを報告した。(4)無細胞翻訳系により、ヘテロサブユニットRNA修飾酵素(Trm8-Trm82)の試験管内合成に成功し、その詳細について報告した。

In vivo, RNA physiological role in the development of the necessary RNA modification, processing, editing and processing engineering (post-writing modification). After the modification, the precursor RNA is released and the function is started. The present invention relates to a method for preparing a novel composition of a novel composition in a test tube, wherein the novel composition is composed of a plurality of components; (1)TrmH-AdoMet-tRNA three-way complex modulation, TrmH recognition site of the part of the body and the RNA-DNA nucleic acid synthesis. The catalyst reaction process was successfully completed, and the reaction intermediate was successfully formed. The results of this research were received, and the X-ray crystal structure analysis was started in Heisei 19. The crystallization conditions were very important. (2)This complex is used in the middle, middle and middle parts of the TrmH C terminal (tRNAI selection site) and contact sites of the tRNA three-dimensional C terminal. (3)Aquifex aeolicus is derived from TrmB, and its C-terminal structure is part of the stability of the structure under high temperature. (4)The synthesis of a cell-free RNA modifying enzyme (Trm8-Trm82) in vitro was successfully reported.

项目成果

The core domain of Aquifex aeolicus tRNA (m^7G46) methyltransferast has the methyl-transfer activity to tRNA

Aquifex aeolicus tRNA (m^7G46) 甲基转移酶的核心结构域具有对 tRNA 的甲基转移活性

• 发表时间: 2006
• 期刊: Nucleic Scids Res. Symp. Ser. 50
• 作者: A. Ochi;and H. Hori;M.Abe;K.Matsumoto;K.Matsumoto;H.Takeda;K.Watanabe;C.Tomikawa
• 通讯作者: C.Tomikawa

翻訳伸長因子EF-TuとtRNA修飾酵素の相互憚用解析系の構築

翻译延伸因子EF-Tu与tRNA修饰酶相互作用分析体系的构建

• 发表时间: 2007
• 作者: 中村 仁;堀 弘幸
• 通讯作者: 堀 弘幸

Detection of structural changes in a cofactor binding protein by using a wheat germ cell-free protein synthesis system coupled with unnatural amino acid probing

• DOI: 10.1002/prot.21341
• 发表时间: 2007-05-15
• 期刊: PROTEINS-STRUCTURE FUNCTION AND BIOINFORMATICS
• 影响因子: 2.9
• 作者: Abe, Masato;Ohno, Satoshi;Endo, Yaeta
• 通讯作者: Endo, Yaeta

Functions of C-terminal region of thermophilic tRNA (m^7G46) methyltransferase (TrmB

嗜热 tRNA (m^7G46) 甲基转移酶 (TrmB) C 端区域的功能

• 发表时间: 2007
• 作者: C. Tomikawa;and H. Hori
• 通讯作者: and H. Hori

Hetero subunit interaction and RNA recognition of yeast tRNA(m7G46)methyltransferase synthesized in a wheat germ cell-free translation system

小麦胚芽无细胞翻译系统中合成的酵母tRNA(m7G46)甲基转移酶的异亚基相互作用和RNA识别

• 发表时间: 2007
• 期刊: Nucleic Scids Res.Symp.Ser 51
• 作者: Y.Muneyoshi;K.Matsumoto;C.Tomikawa;T.Toyooka;A.Ochi;T.Masaoka;Y.Endo;and H.Hori
• 通讯作者: and H.Hori