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薬物排出の最終段階を担う新規有機カチオン輸送体の構造と機能及び相互作用

负责药物流出最后阶段的新型有机阳离子转运蛋白的结构、功能和相互作用

基本信息

批准号：
18059023
负责人：
大塚正人
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18059023/
关键词：
Multidrug transporter organic cation transporter kidney MATE Multidrug Organic cation transport

项目摘要

申請者は現在までにMATEのプロトタイプのVibrio Parahaemolyticus由来のNorMに関して機能性アミノ酸残基を同定している(J Bacteriol,2005)。NorMの薬物輸送に関与する機能性アミノ酸残基は、膜貫通領域に存在している酸性アミノ酸残基であった。バクテリア由来のMATEトランスポーターのNorMは、ヒトMATE1とタンパク質レベルで23.6%の相同性しかないが、これらの酸性アミノ酸残基のうちの2つはヒト及びマウスのMATE1及びMATE2で保存されていた。以上のことから、哺乳類のMATEにおいてもこれらの酸性アミノ酸残基を含む極性アミノ酸残基が、MATEの基質認識機構や、プロトンとの交換輸送機構に直接関係していることが予想される。これらの予想を基にMATE1の点変異体を複数作製した。(MATEの極性残基部分:E278A,E319A,H386A,E389A 等)。そして、TEA(テトラエチルアンモニウム)の取り込み活性に与える影響をRIトレーサー実験により調べた。この結果より機能性アミノ酸残基を決定した。また、MATE1変異体の基質特異性や、輸送活性に及ぼすpHの影響に対する変化についても詳細に解析を行うことによって、OC/H+交換輸送における基質認識機構や、プロトンとの交換輸送機構を解明した。ヒトMATE1の膜貫通領域にある極性アミノ酸のうち、E273Qの点変異体を作成しHEK293細胞に発現させたところ、TEAの輸送活性は完全に消失した(PNAS 2005,)。また、MATE1の機能と構造を理解する上でその分子単体に注目し、大量発現・精製及びそのリポソームへの再構成系を確立した。大量発現系は、昆虫細胞を用いた発現系を用いた。また、大量発現したタンパク質を精製・リポソームに再構成し、活性の測定を行う系を構築した。こうした技術をMATEタンパク質の機能解析に応用した。そして輸送測定で基質とH^+の化学平衡か測定した。

The applicant has not yet identified the functional acid residues of Vibrio Parahaemolyticus from MATE (J Bacteriol,2005). NorM is a functional acid residue associated with the transport of chemicals, and an acidic acid residue is present in the membrane penetration domain. The similarity of 23.6% was obtained from MATE, MATE1 and MATE2, and the acid residues were preserved. The above is a direct relationship between MATE's matrix recognition mechanism and its exchange and transport mechanism. This is the first time I've ever seen you. (MATE polar residues: E278A, E319A, H386A, E389A, etc.). TEA(TEA) is a very important activity in the field of research and development. As a result, functional amino acid residues are determined. MATE1 has different matrix specificity, transport activity, and pH effects. Detailed analysis of matrix recognition mechanisms, OC/H+ exchange transport mechanisms, and exchange transport mechanisms is described. The membrane penetration domain of MATE1 was found in HEK293 cells and the transport activity of TEA was completely lost (PNAS 2005,). To understand the function and structure of MATE1, we focus on the molecular unit, develop and refine the molecular unit, and establish the molecular unit reconstruction system. A large number of insect cells were used in the development of the system. The quality of the products was refined, the composition was reconstructed, and the activity was measured. The technology of MATE is applied to the analysis of quality and function. Determination of chemical equilibrium of H^+ in matrix

项目成果

期刊论文数量（6）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

A novel variant of mouse MATE-1 H+/organic cation antiporter with a long hydrophobic tail

具有长疏水尾的小鼠 MATE-1 H /有机阳离子逆向转运蛋白的新变体

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
Arch. Biochem. Biophys. 469
影响因子：
0
作者：
Kobara;A.;Hiasa;N.;Matsumoto;T.;Otsuka;M.;Omote;H.;and Moriyama;Y.
通讯作者：
Y.

Transmembrane topology of vesicular glutamate transporter 2

DOI：
10.1248/bpb.29.547
发表时间：
2006-03-01
期刊：
BIOLOGICAL & PHARMACEUTICAL BULLETIN
影响因子：
2
作者：
Jung, SK;Morimoto, R;Omote, H
通讯作者：
Omote, H

Identification of a vesicular nucleotide transporter

DOI：
10.1073/pnas.0800141105
发表时间：
2008-04-15
期刊：
PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
影响因子：
11.1
作者：
Sawada, Keisuke;Echigo, Noriko;Moriyama, Yoshinori
通讯作者：
Moriyama, Yoshinori

Role of glutamate residues in substrate recognition by human MATEl polyspecilic H+/organic cation exporter.

谷氨酸残基在人MATEl多特异性H/有机阳离子输出体识别底物中的作用。