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疾患感受性ハプロタイプを検証する為の新規BACトランスジェニック手法の開発

开发一种新的 BAC 转基因方法来验证疾病易感性单倍型

基本信息

批准号：
16651102
负责人：
大塚正人
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Tokai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16651102/
关键词：
gene targeting Transgenic mouse association study single copy Tg chosen locus ES cell recombineering RMCE Bacterial Artificial Chromosome(BAC)homologous recombination ET cloning haplotype

项目摘要

recombineering法を用いたターゲティングベクター(TV)作製とBACクローン改変を簡便に行う為に、独自のベクターを開発した。またE14系ES細胞を用いたTV作製に使用可能な整列化BACライブラリーのPCRスクリーニング系を確立した。これらのリソースを用いていくつかのTVを作製し、実際にターゲティングマウスを作製した。そのうちの一つであるH2-T3遺伝子領域へ導入したコンストラクトは、FRT-Ppgk-neo-変異loxP-IRES-ECFP-pA-lox2272の構造をしており、Recombinase-mediated cassette exchange (RMCE)法を用いて、この領域に目的のコンストラクトをシングルコピーで導入することが可能となるよう設計されている。そこで、実際に11kb程のコンストラクトの導入効率をES細胞内で検証した。その結果、約40%のクローンが目的の組換え体であることを確認した。本手法は非常に効率の良いものであるため、今後改変BACクローンでその効率を比較検討する予定である。必要なベクターは既に開発済みである。また、上記コンストラクトをROSA26座位に導入したES細胞も得ている。実際に遺伝子導入のターゲットとする領域は、相関解析に基づく疾患感受性候補領域を想定しているが、これまで行ってきたゲノムワイドな相関解析により、慢性関節リウマチ、尋常性乾癬の候補領域をいくつか同定している。今年度は、これらの領域をさらに絞り込んだが、その中から尋常性乾癬の感受性遺伝子として有望な候補遺伝子であるCDSN遺伝子に注目し、まずはその過剰発現Tgマウスを作製した。その解析は今後の課題である。

The recombining method can be used to make the BAC system more convenient and independent. E14 ES cells were used to establish a PCR system for possible sequencing of BAC cells. This is the first time I've ever seen a TV show. The structure of H2-T3 hybrid domain is introduced into FRT-Ppgk-neo-loxP-IRES-ECFP-pA-lox2272. The Recombinase-mediated cassette exchange (RMCE) method is used to design the hybrid domain. In fact, the 11-kb sequence of the gene was successfully introduced into ES cells. About 40% of the results were confirmed. This method is very effective in the future. It is necessary to open the door. The above mentioned gene was introduced into ES cells at locus ROSA26 In fact, the candidate fields for gene introduction, correlation analysis, basic disease susceptibility, correlation analysis, chronic joint disease, and psoriasis vulgaris are determined. This year, the field of disease is divided into two parts: the sensitive gene of common psoriasis and the candidate gene of CDSN. Analysis of future issues.

项目成果

期刊论文数量（10）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

hRDH-E2 gene polymorphisms, variable transcriptional start sites, and psoriasis.

hRDH-E2 基因多态性、可变转录起始位点和牛皮癣。

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
Mamm Genome 15
影响因子：
0
作者：
Matsuzawa Y;et al.
通讯作者：
et al.

Construction of mouse 129/Ola BAC library for the targeting experiments using E14 embryonic stem cells.

使用E14胚胎干细胞构建小鼠129/Ola BAC文库用于靶向实验。

DOI：
发表时间：
期刊：
Genes Genet Syst. (in press)
影响因子：
0
作者：
Ohmi Y.;Sato M.;Ohtsuka M;Ohtsuka M. et al.;Matsuzaka et al.;Ohtsuka M. et al.
通讯作者：
Ohtsuka M. et al.

リコンビニアリングコンストラクト、及びジーンターゲティングコンストラクト作製用ベクター

用于产生重组工程构建体和基因靶向构建体的载体