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ソフトな相互作用からなる、塩濃度に敏感な複合体の溶液構造の解析

软相互作用组成的盐浓度敏感配合物的溶液结构分析

基本信息

批准号：
19036027
负责人：
明石知子
金额：
$ 4.16万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19036027/
关键词：
蛋白質生体分子分析科学

项目摘要

NMRやX線結晶構造解析と羅分析を組み合わせることで、タンパク質複合体の構造機能解析を加速することを目指し、塩濃度により複合体の形成が影響を受ける系について構造解析した。バクテリアにおいてトリプトファンの生合成を制御するタンパク質TRAP(trp RNA binding attenuamnprotem)とこれに特異的に結合しTRAPの活性を制御するタンパク質Anti-TRAP(AT)の複合体の構造解析をESI-MSで行った。その結果、(1)TRAP(8.4kDa)は塩濃度に依存せずに主に11量体(一部12量体)で存在すること、(2)Ar(5.7kDa)はpH6.8ではモノマー当たり1つのZn^<2+>を抱えて3量体×4の12量体を形成すること、(3)11量体TRAPはRNAと1 : 1で結合することという結晶構造と整合性のある結果が得られた。ところがTRAP-AT複合体では、結晶構造は12量体TRAP+6×AT3量体が示されているのに対し、500mMという高い酢酸アンモニウム濃度でのESI-MSでは、溶液においては異なるストイキオメトリーをもつ少なくとも4種類のTRAP-AT複合体(11量体TRAP+(3〜5)×AT3量体および12量体TRAP+6×AT3量体)が存在することが示された。このことは、生体内ではさまざまなストイキオメトリーをもつヘテロな状態であっても、X線結晶構造解析の結晶化の過程では対象性がよい構造の複合体のみが選別・結晶化されてしまうのに対し、ESI-MSでは溶液における複合体に関する情報を得ることができ、構造研究においてESI-MSの利用はきわめて有用であることが明らかにされた(Tameらとの共同研究)。再構成したヒストンダイマー、テトラマーについて、形成される多量体は塩濃度依存的に量比が変わることをESI-MSで解析した。

NMR analysis of X-ray crystallographic structure and structural analysis of complex structure and function is accelerated. ESI-MS was used to analyze the structure of anti-TRAP (AT) complexes. The results are as follows: (1) TRAP (8.4 kDa) is concentration-dependent, mainly 11-mer (one part 12-mer), exists;(2) Ar (5.7 kDa) is concentration-dependent, mainly 11-mer (one part 12-mer), exists;(3) 11-mer TRAP is concentration-dependent, mainly 11-mer (one part 12-mer), exists;(4) Ar (5.7 kDa) is concentration-dependent, mainly 11-mer (one part 12-mer), exists;(5) Ar (5.7 kDa) is concentration-dependent, mainly 11-mer (one part 12-mer), exists;(6) Ar (5.7 kDa) is concentration-dependent, mainly 11-mer (one part 12-mer), exists;(7) Ar (5.7 kDa) is concentration-dependent, mainly 11-mer (one part 12-mer), mainly 11-mer (one part 12-mer), exists;(7) Ar (5 The crystal structure of TRAP-AT complex is 12-volume TRAP +6 × AT 3 volume, and the ESI-MS of 500 mM medium and high acid concentration is 12-volume TRAP +(3~5) × AT 3 volume and 12-volume TRAP +6 × AT 3 volume. In this case, the crystallization process of X-ray crystallographic structure analysis in vivo, the selection of structural complexes, the crystallization process, and the ESI-MS information on the complex in solution. Structural research and utilization of ESI-MS (joint research) The composition of the composition is based on the concentration dependence of ESI-MS.