权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

組換え体を用いた軸糸外腕ダイニン運動機構の解明

使用重组细胞阐明轴丝臂外动力蛋白运动机制

基本信息

批准号：
19037008
负责人：
豊島陽子
金额：
$ 3.26万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19037008/
关键词：
分子モーターナノバイオ 1分子計測光ピンセット分子機械

项目摘要

平成19年度までに、テトラヒメナの発現系を用いて、3頭構造をもつ軸糸外腕ダイニンのそれぞれの頭部のC末端側にタグを挿入して蛍光標識を行い、それらが微小管上を連続的に動くことを観察してきたが、本年度は3つの頭部の動きを詳細に解析し、複数頭部のあいだの運動の協調性を見ることを目的に実験を行った。ダイニン頭部の可視化のためのプローブとして安定した蛍光をもつQdotを利用しているが、シグナルのノイズが大きく、その原因としてレールとなる微小管の種類や、微小管のガラス上への固定法が不十分であることが考えられる。そこでレールとしてテトラヒメナの軸糸を使用したところ、ややノイズが減る傾向があることがわかった。しかし、ナノメートルレベルの解析には十分ではなかったため、ガラスへの固定法として、(1)アゾポリマーで処理したガラス意表面上に光照射で軸糸の固定を行ったところ、改善が見られた。また、(2)ガラス表面をシラン化して共有結合あるいはキネシンミュータントを利用して微小管を固定する方法を検討中である。さらにまた、全反射蛍光(TIRF)顕微鏡による観察像からその輝点の重心を自動的に求めるためのプログラムを開発し、自動追跡により大量のデータを効率よく処理することが可能となった。テトラヒメナの発現系を使ったダイニンの構築としては、ダイニン尾部のN末端や、尾部の頭部よりの位置にタグを導入し、蛍光標識をすること及びそれらの運動性を確認した。

In 2019, the development system of the three-head structure was used, the C-terminal side of the head was inserted into the three-head structure, and the movement of the micro-tube was observed. In 2019, the movement of the three-head structure was analyzed in detail, and the coordination of the movement of the multiple heads was observed. The type of micro tube and the fixing method of micro tube are not very good. The axis of the shaft is used in the direction of rotation. (1) The fixing method of light irradiation on the surface of the shaft, the fixing method of the shaft, and the improvement method. (2) The method of fixing the microtube is discussed. In addition, the total reflection fluorescence (TIRF) micro-mirror can automatically detect the center of gravity of the bright spot, and automatically track the image. The structure of the tail and the position of the head of the tail are introduced, and the movement of the tail and the head is confirmed.

项目成果

期刊论文数量（5）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Minus-end-directed motor ncd exhibits processive movement that is enhanced by microtubule bundling in vitro

DOI：
10.1016/j.cub.2007.12.056
发表时间：
2008-01-22
期刊：
CURRENT BIOLOGY
影响因子：
9.2
作者：
Furuta, Ken'ya;Toyoshima, Yoko Yano
通讯作者：
Toyoshima, Yoko Yano

Direction and Speed of Microtubule Movements Driven by Kinesin Motors Arranged on Catchin Thick Filaments

布置在 Catchin 粗丝上的驱动蛋白马达驱动微管运动的方向和速度

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
Journal of Muscle and Cell Motility 65
影响因子：
0
作者：
Toshiki Taba;Masaki Edamatsu;Shiori Toba;Keitaro Shibata;Yasuhiro Imafuku;Yoko Yano Toyoshima;Katsuhisa Tawada;Akira Yamada
通讯作者：
Akira Yamada

NDEL1 phosphorylation by aurora-A kinase is essential for centrosomal maturation, separation, and TACC3 recruitment