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核分裂におけるキネシン様タンパク質の役割

驱动蛋白样蛋白在核裂变中的作用

基本信息

批准号：
10162203
负责人：
豊島陽子
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

紡錘体極の形成と紡錘体の維持には、キネシン様タンパク質(KRP)のうちBimCサブファミリー(+端方向へ力を出す)と、Kar3サブファミリー(-端方向へ力を出す)の反対向きの力を出す2種のモータータンパク質が必要であることが、コウジカビ、出芽酵母、分裂酵母、アフリカツメガエル卵での研究から明らかになってきた。これら2種のモーター活性の分子的基盤を得るために、今回我々は、分裂酵母のCut7(BimC サブファミリー)とPkl1(Kar3 サブファミリー)のクローニングを行い、タンパク質を精製してその運動活性を再構成運動系で調べた。Pkl1をGSTとBCCPの融合タンパク質として発現し、ビオチン-アビジン系を用いてスライドガラス上に固定すると、ATP存在下で微小管が滑走運動を行うことを観察することができた。極性マーカーのついた微小管を用いることによって、微小管の運動の極性は+端が先頭であり、Pkl1自身は-端へ向かうモーターであることを確認した。運動速度はばらつきがあるが、平均で0.038μm/秒であった。運動を観察した微小管のうち約半数は、1点を中心にピボッティングしながら前進運動していくことが観察された。このピボッティングの現象は、ふれの角度が最大150度で、4分間にわたり10μmの移動距離で起こるものもあり、これらの結果は、キネシンと同様に、1分子のPkl1が微小管上を連続的に移動できる能力(processivity)をもつことを示唆している。KRPにおいてはキネシン以外にprocessivityをもつことが確認されている分子はなく、-端モーターであるPkl1がこのような能力を持つことは、KRP全体からみても、また紡錘体機能を考える上でも大変興味深い。

Spindle pole formation and spindle maintenance are studied in the following ways: reverse rotation, reverse rotation, budding yeast, splitting yeast, and reverse rotation of KRP. The substrate of two kinds of active molecules was obtained, and now I am back, and the cut of yeast 7(BimC) and Pkl1(Kar3) were used to construct the kinetic system. Pkl1, GST and BCCP fusion, quality, development, application, fixation, ATP presence, microtube sliding motion. The polarity of the microtube is confirmed by the polarity + end of the microtube. Movement speed, average 0.038μm/s The movement can be observed. About half of the tiny tubes are in the center, and at 1 o'clock in the center, the forward movement can be observed. The phenomenon of "Pkl 1" is that the angle of movement is up to 150 degrees, the movement distance is 10μm in 4 minutes, and the result is that the movement ability of 1 molecule of Pkl1 is up to 150 degrees. KRP is the most important factor in the development of KRP, and it is the most important factor in the development of KRP.