小胞輸送を介したシグナル伝達制御におけるカルパイン7/PalBHの役割

钙蛋白酶 7/PalBH 在通过囊泡运输调节信号转导中的作用

• 批准号: 19044017
• 负责人: 牧 正敏
• 金额: $ 4.29万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19044017/
• 关键词: カルパイン; MITドメイン; ESCRT; 相互作用; プロテアーゼ; CHMP 1; IST1; calpain; MIT; endosome; CHMP; EGF; MVB; protease

calpain 7(別名 : PalBH)は、Aspergillus nidulansで最初に報告されたPalBの哺乳類ホモログである。PalBはカビのpH環境に応答する転写因子を限定分解するプロテアーゼとして発見されたが、哺乳類での機能に関しては全く不明であり、酵素活性をもつかどうかさえ分かっていない。本研究は、calpain 7がN末端領域にMITドメインをもつことに注目し、動物細胞内での生理作用についてヒントを得る目的で行ったものである。MITドメインがエンドソーム選別輸送複合体ESCRT-IIIの構成因子と相同なCHMP 1A、1Bと結合することを2008年度に明らかにした。本年度はCHMP 1と二量体を形成すること、そしてAAA型ATPaseのMITドメインと結合することが最近明らかにされたIST1とcalpain 7のMITドメインが同様に相互作用する可能性を検討した。エピトープタグ(FLAG)を付加したIST1をHEK293細胞に発現させ、免疫沈降するとcalpain 7が共に沈降されること、逆にGFP融合calpain 7を共発現させるとFLAG-IST1が抗GFP抗体で沈降することより、calpain 7とIST1の相互作用が明らかとなった。この相互作用には変異体解析より、calpain 7のMITドメインが必要なこと、そして、IST1のC末端領域の必要性が判明した。IST1が直接calpain 7のMITドメインに結合するのか、あるいはCHMP 1を介して結合するのか、今後、組換タンパク質を用いて明らかにする必要がある。calpain 7のプロテアーゼ活性は依然として明らかにすることができなかったが、活性中心と想定されるCys290の変異体と野生型で発現させたタンパク質の分解パターンに若干の差が見出され、酵素活性をもつかどうか、さらに検討する必要がある。

calpain 7(also known as PalBH) に and Aspergillus nidulansで initially に reported されたPalB <s:1> mammals ホモログである. PalB は カ ビ の pH に 応 answer す る planning write factor decomposition す を limit る プ ロ テ ア ー ゼ と し て 発 see さ れ た が, mammals で の function に masato し て は く all unknown で あ り, enzyme activity を も つ か ど う か さ え points か っ て い な い. は, this study calpain 7 が N terminal areas に MIT ド メ イ ン を も つ こ と に attention し, animal cells で の physiology に つ い て ヒ ン ト を should る purpose で っ た も の で あ る. MIT ド メ イ ン が エ ン ド ソ ー ム choose don't conveying complex ESCRT - III の constitute factor と same な CHMP 1 a and 1 b と す る こ と を 2008 に Ming ら か に し た. This year は を CHMP 1 と quantity body formation す る こ と, そ し て AAA type ATPase の MIT ド メ イ ン と combining す る こ と が Ming recently ら か に さ れ た IST1 と calpain 7 の MIT ド メ イ ン が with others に interaction す る possibility を beg し 検 た. エ ピ ト ー プ タ グ (FLAG) を plus し た IST1 を HEK293 cells に 発 now さ せ, immune sink す る と calpain 7 が altogether に sink さ れ る こ と, reverse に calpain GFP fusion 7 を 発 now total さ せ る と FLAG - IST1 が GFP antibody resistance で sink す る こ と よ り, calpain 7 と IST1 の interaction が Ming ら か と な っ た. こ の interaction に は - variant parsing よ り, calpain 7 の MIT ド メ イ ン が necessary な こ と, そ し て, IST1 の C terminal areas の necessity が.at し た. IST1 が directly calpain 7 の MIT ド メ イ ン に combining す る の か, あ る い は CHMP 1 を interface し て combining す る の か group, in the future, in タ ン パ ク qualitative を with い て Ming ら か に す る necessary が あ る. Calpain 7 の プ ロ テ ア ー ゼ active は still と し て Ming ら か に す る こ と が で き な か っ た が, active center と scenarios さ れ る Cys290 の - variant と wild-type で 発 now さ せ た タ ン パ ク qualitative の decomposition パ タ ー ン に out several poor の が さ れ, enzyme activity を も つ か ど う か, さ ら に beg す 検 る necessary が あ る.

项目成果

Brox, a novel farnesylated Bro1 domain-containing protein that associates with charged multivesicular body protein 4 (CHMP4)

• DOI: 10.1111/j.1742-4658.2007.06230.x
• 发表时间: 2008-02-01
• 期刊: FEBS JOURNAL
• 影响因子: 5.4
• 作者: Ichioka, Fumitaka;Kobayashi, Ryota;Maki, Masatoshi
• 通讯作者: Maki, Masatoshi

ヒトcalpain7/PalBHに存在するMITドメインと相互作用する因子の探索

寻找与人类 calpain7/PalBH 中存在的 MIT 结构域相互作用的因子

• 发表时间: 2007
• 作者: 大迫 洋平;ら
• 通讯作者: ら

Identification of Alix-type and non-Alix-type ALG-2-binding sites in human phospholipid scramblase 3 - Differential binding to an alternatively spliced isoform and amino acid-substituted mutants

• DOI: 10.1074/jbc.m800717200
• 发表时间: 2008-04-11
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Shibata, Hideki;Suzuki, Hironori;Maki, Masatoshi
• 通讯作者: Maki, Masatoshi

ESCRT-III関連因子CHMP 1Bとcalpain 7との相互作用

ESCRT-III 相关因子 CHMP 1B 与钙蛋白酶 7 之间的相互作用

• 发表时间: 2008
• 作者: 大迫洋平;ら他7名
• 通讯作者: ら他7名

Human calpain 7/PalBH associates with a subset of ESCRT-III-relatedproteins in its N-terminal region and partly localizes to endocytic membranecompartments.

人钙蛋白酶 7/PalBH 在其 N 末端区域与 ESCRT-III 相关蛋白的子集相关，并部分定位于内吞膜室。

• 发表时间: 2008
• 期刊: J. Biochem. (印刷中)
• 作者: Yorikawa C;Hamakubo T;Mochizuki Y;Iwanari H;Maki M ed al.
• 通讯作者: Maki M ed al.