細胞外サイクリックADPリボースのセンサー機構

细胞外环ADP-核糖的传感机制

• 批准号: 19045011
• 负责人: 橋井 美奈子
• 金额: $ 3.78万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19045011/
• 关键词: サイクリックADPリボース; CD38; カルシウムイオン; 視床下部; NG108-15細胞; TRPM2チャネル; cADPRアナログ; 質量分析; オキシトシン; Mカリウム電流; cADPcR; 脳下垂体

サイクリックADPリボース(cADPR)は、CD38分子により細胞外でβ-NAD^+から作られるセカンドメッセンジャーであり、温度感受性センサーであるTRPM2チャネルを活性化することがわかってきた(Togashi, Tominagaet al. ; 2006, 2008)。今回、(1) 神経細胞において細胞外に投与したcADPRがTRPM2を活性化し細胞内Ca^<2+>濃度上昇をおこすか?(2) CD38にどのような周辺蛋白が結合し、酵素活性を調節するのか(3) 安定かつ細胞外から投与できるcADPRアナログの開発、の3点を調査した。本年度の成果として、まず上記(1) に関して、視床下部の一次培養神経・NG108-15培養神経細胞共に、温度を37Cに上昇させると、細胞外cADPR存在下で顕著な細胞内Ca^<2+>濃度上昇が起こることを見出した。この現象は細胞外β-NAD^+もしくはADPR投与でも出現し、さらに視床下部・NG108-15細胞共にTRPM2のmRNAが発現していることがわかり、神経細胞においてもcADPRがTRPM2チャネルを活性化しCa^<2+>流入を起こすことが予想された。次に上記(2) については、HEK293T細胞にhCD38-HA融合蛋白を発現させ、HA抗体ビーズで免疫沈降、結合蛋白を回収し、2次元電気泳動で分離した。hCD38発現細胞にのみにみられるスポットを切り出し、MALDI-TOF/MS質量分析を行った結果、ATP synthaseなどの3種の酵素が得られた。次に上記(3) に関しては、カーボ型の合成cADPRアナログ(cADPcR : cyclic ADP-carbocyclic ribose)を用いてNG108-15細胞への細胞外投与の効果を調べ、暖温下でやはり細胞内Ca^<2+>濃度上昇を引き起こすことを見出した。

The temperature sensitivity is similar to that of ADP, TRPM2, TRPM2, activation, activation, temperature, temperature and temperature. 2006, 2008). This time, (1) the extracellular cycle of cADPR TRPM2 and the activation of lt;2+>. (2) the combination of CD38 protein and enzyme activity. (3) the extracellular cycle of tranquilizer and the activation of cADPR. This year, the results show that the results of this year are as follows: (1) in the lower part of the bed, the culture of NG108-15, the temperature of 37C, the presence of extracellular cADPR and the increase of intracellular Ca ^ and lt;2+>. For example, the extracellular β-nad ^ + cell ADPR has been detected, the cell in the lower part of the bed NG108-15 has been detected by TRPM2, the mRNA has been detected, the cell has been activated by cADPR, TRPM2, and activated by lt;2+>. In the second step (2), the hCD38-HA fusion protein of HEK293T cell was detected, the immune sedimentation of HA antibody was detected, the binding protein was detected, and the two-step gel electrophoresis was performed. The results of hCD38 assay, MALDI-TOF/MS assay and ATP synthase assay showed that the three enzymes were purified. In the second half of the experiment (3), the synthetic cADPR (cADPcR: cyclic ADP-carbocyclic ribose) was induced by extracellular injection (ECV) of NG108-15 cells and intracellular Ca ^ & lt;2+> at warm temperatures.

项目成果

Design and synthesis of 4", 6"-unsaturated cyclic ADP-carbocyclic ribose as a Ca^<2+> -mobilizing agent.

设计和合成4",6"-不饱和环状ADP-碳环核糖作为Ca^2-动员剂。

• 发表时间: 2008
• 期刊: Tetrahedron Letters 49
• 作者: Kudou;T.;Weber;K.;……Hashii;M.;Higashida;H.;……Shuto;S.;他4名
• 通讯作者: 他4名

Design and synthesis of 4", 6"-unsaturated cyclic ADP-carbocyclic-ribose, a Ca^<2+> -mobilizing agent selectively active in T cells.

4”，6”-不饱和环状ADP-碳环-核糖的设计和合成，一种在T细胞中选择性活性的Ca 2+ 动员剂。

• 发表时间: 2008
• 期刊: Tetrahedron. 64
• 作者: Kudou;T.;Murakami;T.;Hashii;M.;Higashida;H.;……Shuto;S.;他8名
• 通讯作者: 他8名

Oxytocin released from mouse hypothalamus and nerve endings by extracellular applicaion of beta-NAD+ and cyclic ADP-ribose.

通过细胞外应用 β-NAD 和环状 ADP-核糖从小鼠下丘脑和神经末梢释放催产素。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Nature Protocols 10
• 作者: Jin D;Hashii M;Higashida H;et. al.
• 通讯作者: et. al.

サイクリックADPリボースの神経細胞内Ca動員機構の解析

环ADP核糖神经元内Ca动员机制分析

• 发表时间: 2008
• 作者: アミナサラワト;橋井美奈子ら
• 通讯作者: 橋井美奈子ら

Up-regulation of ras-Gap genes is reversed by a MEK inhibitor and doxorubicin in v-Ki-ras transformed NIH/3T3 fibroblasts.

在 v-Ki-ras 转化的 NIH/3T3 成纤维细胞中，MEK 抑制剂和阿霉素可逆转 ras-Gap 基因的上调。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Biochem Biophys Res Commun 356
• 作者: Hashii;M.;Fukuda;M.;Nomura;H.;Ito;N.;Takahashi;H.;Hattori;S.;Mikoshiba;K.;Noda;M. & Higuchi;Y.
• 通讯作者: Y.