ヒト、マウスにおける神経細胞特異的インプリンティング遺伝子の探索

寻找人类和小鼠神经元特异性印记基因

• 批准号: 20022032
• 负责人: 木住野 達也
• 金额: $ 4.99万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20022032/
• 关键词: インプリンティング; 母親由来2倍体ES細胞; 神経幹細胞; 前駆細胞; UBE3A

ゲノムインプリンティングとは配偶子(精子・卵)依存的で後成的なゲノム上の修飾(エピジェネティクス)による遺伝子発現の変化であり、哺乳類の初期発生や悪性腫瘍の発症に関与するだけでなく、脳高次機能にも重要な役割を果たしていると考えられている。今回我々は脳におけるインプリンティングの役割を系統的に解析するために、母親由来2倍体神經細胞(母親ゲノムのみの2倍体神経細胞)を作製し、母親由来2倍体神経細胞と正常神経細胞の遺伝子発現プロフィールを比較する事により、神経細胞特異的な新規インプリンティング遺伝子の単離を試みた。母親由来2倍体神経細胞の作製法は、GFPマウスの未受精卵をストロンチウムで刺激し発生した雌核発生初期胚と正常発生野生型初期胚をアグリゲーション法にて融合し、キメラ胚盤法として卵管に戻す。胎生15日目の胎仔脳を分散培養しソーターによりGFP陽性雌核発生神経細胞を分取した。分取した細胞は細胞密度が低く培養し成熟した神經細胞にまで培養できなかった。一方、神経細胞特異的に発現するインプリンティング遺伝子にSnrpn遺伝子、及びSnrpn遺伝子にオーバーラップして発現するIC-transcriptが存在する。IC-transcriptの神経細胞特異的発現をみるためにSnrpn promoterをconditionalノックアウトし、Snrpn exon1下流にIRES-GFPをノックインした遺伝子組換えマウスを「統合脳」での「C57BL/6由来ES細胞を用いたコンディショナルノックアウトマウス作成支援事業」にて作製した。現在IC-transcriptの脳における発現をGFPを指標に解析している。

In mammals, the development of early reproductive and reproductive tumors is related to the development of higher-order functions, such as sperm and egg. In this paper, we analyzed the gene expression system of maternal diploid neurons (maternal diploid neurons), compared the gene expression of maternal diploid neurons with normal neurons, and tested the gene expression system of neuronal cell-specific diploid neurons. The method for preparing maternal-derived diploid neurons includes the following steps: stimulating the development of female embryonic stage and normal development of wild-type embryonic stage; fusing; blastodermic method; The 15-day-old fetus was separated from the GFP-positive gynogenesis cells. The density of isolated cells was low, and mature neurons were cultured. The IC-transcript exists for the expression of SNRPN gene, SNRPN gene and SNRPN gene. IC-Transcript and Neurocyte-specific Expression: "C57BL/6-derived ES Cell Use: C57BL/6-derived ES Cell Support" Now IC-transcript is displayed and GFP indicators are analyzed.

项目成果

Identification of annexin A1 as a novel substrate for E6AP‐mediated ubiquitylation

• DOI: 10.1002/jcb.22096
• 发表时间: 2009-04
• 期刊: Journal of Cellular Biochemistry
• 影响因子: 4
• 作者: T. Shimoji;Kyoko Murakami;Y. Sugiyama;Mami Matsuda;Sachiko Inubushi;J. Nasu;Masayuki Shirakura;Tetsuro Suzuki;T. Wakita;T. Kishino;H. Hotta;T. Miyamura;I. Shoji

Angelman症候群原因遺伝子UBE3Aトランスジェニックマウスの解析

引起Angelman综合征的UBE3A转基因小鼠分析

• 发表时间: 2009
• 作者: Shimoji T;et al;木住野達也
• 通讯作者: 木住野達也

Developmentally dynamic changes of DNA methylation in the mouse Snurf/Snrpn gene

• DOI: 10.1016/j.gene.2008.11.019
• 发表时间: 2009-03-01
• 期刊: GENE
• 影响因子: 3.5
• 作者: Miyazaki, Kazumi;Mapendano, Christophe K.;Kishino, Tatsuya
• 通讯作者: Kishino, Tatsuya