NCX分子複合体の生体膜ミクロドメイン集積機構の解析

NCX分子复合物生物膜微区组装机制分析

• 批准号: 20056030
• 负责人: 岩本 隆宏
• 金额: $ 3.2万
• 依托单位: Fukuoka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20056030/
• 关键词: トランスポーター; 生体分子; シグナル伝達; 薬理学; 生理学; Na^+; Ca2^+交換輸送体; TRPCチャネル; 膜分子複合体; 血管収縮; 遺伝子改変マウス; 細胞内Ca2^+シグナル

Na/Ca交換体分子複合体の分子構成、制御機構、生理機能および病態との関わりについて解析した。血管平滑筋特異的NCXI高発現マウスでは野生型マウスに比べてフェニレフリン刺激時の血管収縮(細胞内Ca^<2+>シグナル)が有意に増大していること、またこれらの血管反応は特異的NCX阻害薬により抑制されることを見いだした。この機序を解析する目的で、血管平滑筋細胞を用いた免疫沈降実験、免疫染色実験およびショ糖密度勾配分離実験を行ったところ、NCX1はTRPC3と相互作用しカベオラ分画に共存していることが示唆された。そこで、血管平滑筋特異的TRPC3高発現マウスを作製したところ、フェニレフリン刺激時の血管収縮(細胞内Ca^<2+>シグナル)が顕著に増大することを観察した。一方、NCX1ヘテロ欠損マウスおよび抑制型TRPC3高発現マウスでは、同刺激の細胞内Ca^<2+>シグナルが有意に減弱していた。これらの結果は、TRPC3/NCX1共役系がα_1受容体を介する血管トーヌス制御に重要な役割を果すことを示唆している。さらに、NCX1のN末端細胞外領域にc-mycエピトープを挿入し、NCX1の生理的機能を損なわずに細胞膜表面上のNCX1のみを蛍光標識myc抗体で可視化する方法を開発した。また、特記すべき成果として、NCX1の細胞内ドメインに相互作用する蛋白質のスクリーニング試験を実施し、血管平滑筋および腎尿細管におけるNCX1分子複合体の局在制御およびトラフィック機構に関わる新規なアダプター蛋白質(scaffold蛋白質)を同定した。

分析了Na/Ca交换器分子复合物的分子结构，调节机制，生理功能和病理关系。我们发现，与野生型小鼠相比，血管平滑肌特异性的高表达NCXI的小鼠的苯肾上腺素刺激后血管收缩（细胞内Ca^<2+>信号）显着增加，并且这些血管反应被特定的NCX抑制剂抑制。为了分析这种机制，我们使用血管平滑肌细胞进行了免疫沉淀实验，免疫染色实验和蔗糖密度梯度分离实验，并建议NCX1与TRPC3和Caveola分数中的共同居住。因此，当制备表达TRPC3特异性血管平滑肌的小鼠时，我们观察到刺激苯肾上腺素后血管收缩（细胞内Ca^<2+>信号）显着增加。另一方面，在具有异置脱节的NCX1和过度抑制性TRPC3的小鼠中，刺激性细胞内Ca^<2+>信号显着降低。这些结果表明，TRPC3/NCX1共轭系统在α_1受体介导的血管调节中起重要作用。此外，我们开发了一种将C-MYC表位插入NCX1的N末端细胞外区域，并仅在细胞膜表面上可视化NCX1，并具有荧光标记的MYC抗体而不会损害NCX1的生理功能。此外，作为一个特别的注意，我们对与NCX1的细胞内结构域相互作用进行了筛选测试，并确定了参与血管平滑肌和肾管中NCX1分子复合物的定位调节和交通机理的新型衔接蛋白（支架蛋白）。

项目成果

TRPC3/NCX1共役系による交感神経性血管トーヌス制御

TRPC3/NCX1 耦合系统控制交感血管紧张

• 发表时间: 2009
• 作者: Ema;H.;et al.;喜多紗斗美;伊豫田拓也;森口茂樹;喜多紗斗美
• 通讯作者: 喜多紗斗美

A Na+/Ca2+ exchanger isoform, NCX1, is involved in retinal cell death after N-methy1-D-aspartate iniection and ischemia-reperfusion

Na /Ca2 交换异构体 NCX1 参与 N-甲基1-D-天冬氨酸注射和缺血再灌注后视网膜细胞死亡

• 发表时间: 2009
• 期刊: J Neurosci Res 87
• 作者: Inokuchi;Y.
• 通讯作者: Y.

アルドステロン刺激が誘発する心臓リモデリングに対するNa^+/Ca^<2+>交換輸送体の関与

Na^+/Ca^2+交换转运蛋白参与醛固酮刺激诱导的心脏重塑

• 发表时间: 2008
• 作者: Ema;H.;et al.;喜多紗斗美;伊豫田拓也;森口茂樹;喜多紗斗美;岩本隆宏;喜多紗斗美;伊豫田拓也;上原吉就;坂本多穂;喜多紗斗美;伊豫田拓也;喜多紗斗美;伊豫田拓也;喜多紗斗美;喜多紗斗美;伊豫田拓也;上原吉就;伊豫田拓也;喜多紗斗美;岩本隆宏;喜多紗斗美;喜多紗斗美;喜多紗斗美;喜多紗斗美;伊豫田拓也
• 通讯作者: 伊豫田拓也

Salt retention leads to 'whole body autoregulation' and hypertension, but what is the signaling pathway?

盐潴留会导致“全身自动调节”和高血压，但信号通路是什么？

• 发表时间: 2008
• 作者: Zhang;J.
• 通讯作者: J.

血管平滑筋NCX1/TRPC3共役系のα1受容体刺激増幅機構としての役割

血管平滑肌NCX1/TRPC3耦合系统作为α1受体刺激放大机制的作用

• 发表时间: 2008
• 作者: Ema;H.;et al.;喜多紗斗美;伊豫田拓也;森口茂樹;喜多紗斗美;岩本隆宏;喜多紗斗美;伊豫田拓也;上原吉就;坂本多穂;喜多紗斗美;伊豫田拓也;喜多紗斗美;伊豫田拓也;喜多紗斗美;喜多紗斗美
• 通讯作者: 喜多紗斗美