NCX分子複合体の生体膜ミクロドメイン集積機構の解析

NCX分子复合物生物膜微区组装机制分析

• 批准号: 20056030
• 负责人: 岩本 隆宏
• 金额: $ 3.2万
• 依托单位: Fukuoka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20056030/
• 关键词: トランスポーター; 生体分子; シグナル伝達; 薬理学; 生理学; Na^+; Ca2^+交換輸送体; TRPCチャネル; 膜分子複合体; 血管収縮; 遺伝子改変マウス; 細胞内Ca2^+シグナル

Na/Ca交換体分子複合体の分子構成、制御機構、生理機能および病態との関わりについて解析した。血管平滑筋特異的NCXI高発現マウスでは野生型マウスに比べてフェニレフリン刺激時の血管収縮(細胞内Ca^<2+>シグナル)が有意に増大していること、またこれらの血管反応は特異的NCX阻害薬により抑制されることを見いだした。この機序を解析する目的で、血管平滑筋細胞を用いた免疫沈降実験、免疫染色実験およびショ糖密度勾配分離実験を行ったところ、NCX1はTRPC3と相互作用しカベオラ分画に共存していることが示唆された。そこで、血管平滑筋特異的TRPC3高発現マウスを作製したところ、フェニレフリン刺激時の血管収縮(細胞内Ca^<2+>シグナル)が顕著に増大することを観察した。一方、NCX1ヘテロ欠損マウスおよび抑制型TRPC3高発現マウスでは、同刺激の細胞内Ca^<2+>シグナルが有意に減弱していた。これらの結果は、TRPC3/NCX1共役系がα_1受容体を介する血管トーヌス制御に重要な役割を果すことを示唆している。さらに、NCX1のN末端細胞外領域にc-mycエピトープを挿入し、NCX1の生理的機能を損なわずに細胞膜表面上のNCX1のみを蛍光標識myc抗体で可視化する方法を開発した。また、特記すべき成果として、NCX1の細胞内ドメインに相互作用する蛋白質のスクリーニング試験を実施し、血管平滑筋および腎尿細管におけるNCX1分子複合体の局在制御およびトラフィック機構に関わる新規なアダプター蛋白質(scaffold蛋白質)を同定した。

Analysis of molecular composition, regulatory mechanism, physiological function of Na/Ca exchanger molecular complex Angiosmooth muscle-specific NCXI hyperactivity was intentionally increased compared to wild-type NCX inhibition when stimulated by NCX (intracellular Ca^<2+>). For the purpose of sequence analysis, vascular smooth muscle cells are used for immunoprecipitation, immunostaining, and carbohydrate density matching, and NCX1 TRPC3 interactions are used for blue shift. In addition, vascular smooth muscle-specific TRPC3 high expression was observed during the inhibition of vascular contraction (intracellular Ca^<2+>) during stimulation. NCX-1 was found to be deficient and inhibited by TRPC-3, but the intracellular Ca^<2+> was found to be decreased by the same stimulation. The results showed that TRPC3/NCX1 co-operating system was an important part of the vascular control system. In addition, the N-terminal extracellular domain of NCX1 was detected by c-myc antibody, and the physiological function of NCX1 was impaired. The method for visualizing NCX1 on the cell membrane surface by c-myc antibody was developed. In addition, the NCX1 molecular complex was identified as a new protein (scaffold protein) in the regulation of vascular smooth muscle and renal tubule.

项目成果

Regulation of vascular tone by Na^+/Ca^<2+> exchanger/cation channel coupling.

通过Na ^ /Ca ^ 2 交换器/阳离子通道耦合调节血管张力。

• 发表时间: 2008
• 作者: 白井寿治;清水徹;全陽;高谷松文;土屋弘行;天野睦紀;喜多紗斗美
• 通讯作者: 喜多紗斗美

TRPC3/NCX1共役系による交感神経性血管トーヌス制御

TRPC3/NCX1 耦合系统控制交感血管紧张

• 发表时间: 2009
• 作者: Ema;H.;et al.;喜多紗斗美;伊豫田拓也;森口茂樹;喜多紗斗美
• 通讯作者: 喜多紗斗美

血管平滑筋NCX1/TRPC3共役系のα1受容体刺激増幅機構としての役割

血管平滑肌NCX1/TRPC3耦合系统作为α1受体刺激放大机制的作用

• 发表时间: 2008
• 作者: Ema;H.;et al.;喜多紗斗美;伊豫田拓也;森口茂樹;喜多紗斗美;岩本隆宏;喜多紗斗美;伊豫田拓也;上原吉就;坂本多穂;喜多紗斗美;伊豫田拓也;喜多紗斗美;伊豫田拓也;喜多紗斗美;喜多紗斗美
• 通讯作者: 喜多紗斗美

α1受容体を介する血管トーヌス制御機構 : TRPC3/NCX1共役系の役割

α1受体介导的血管紧张控制机制：TRPC3/NCX1耦合系统的作用

• 发表时间: 2008
• 作者: Ema;H.;et al.;喜多紗斗美;伊豫田拓也;森口茂樹;喜多紗斗美;岩本隆宏;喜多紗斗美;伊豫田拓也;上原吉就;坂本多穂;喜多紗斗美;伊豫田拓也;喜多紗斗美;伊豫田拓也;喜多紗斗美;喜多紗斗美;伊豫田拓也;上原吉就;伊豫田拓也;喜多紗斗美
• 通讯作者: 喜多紗斗美

アルドステロン刺激が誘発する心臓リモデリングに対するNa^+/Ca^<2+>交換輸送体の関与

Na^+/Ca^2+交换转运蛋白参与醛固酮刺激诱导的心脏重塑

• 发表时间: 2008
• 作者: Ema;H.;et al.;喜多紗斗美;伊豫田拓也;森口茂樹;喜多紗斗美;岩本隆宏;喜多紗斗美;伊豫田拓也;上原吉就;坂本多穂;喜多紗斗美;伊豫田拓也;喜多紗斗美;伊豫田拓也;喜多紗斗美;喜多紗斗美;伊豫田拓也;上原吉就;伊豫田拓也;喜多紗斗美;岩本隆宏;喜多紗斗美;喜多紗斗美;喜多紗斗美;喜多紗斗美;伊豫田拓也
• 通讯作者: 伊豫田拓也