ADAMTS13の基質認識・切断に対する細胞外環境の効果

细胞外环境对 ADAMTS13 底物识别和裂解的影响

• 批准号: 20057036
• 负责人: 宮田 敏行
• 金额: $ 2.56万
• 依托单位: National Cardiovascular Center Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20057036/
• 关键词: 血小板血栓; ADAMTS13; プロラアーゼ; 立体構造解析; 血栓性血小板減少性紫斑病; 組み換え体; 血小板凝集; 結晶解析; プロテアーゼ

ADAMTS13は、血漿中のvon Willebrand因子(VWF)を高ずり応力下で切断することでVWFマルチマーの分子量を調節し、血小板血栓形成を制御している。ADAMTS13活性の欠失は細小血管における血小板血栓形成を引き起こすため、血栓性血小板減少性紫斑病の原因となる。我々はADAMTS13のディスインテグリン様(D)ドメイン、TSP1(T)ドメイン、Cys-rich(C)ドメイン、スペーサー(S)ドメインから構成される領域ADAMTS13-DTCS(Arg287-Ala685)の立体構造をX線結晶構造解析法により決定した。DTCS組み換え体はCHO-Lec細胞の分泌発現系を用いて調製し結晶を作製した。次いで、SPring-8においてX線回折強度データを取得し、立体構造を決定した。その結果、(1)Dドメインはディスインテグリン様の立体構造ではなく、アミノ酸配列の相同性が低いCドメインと同一の立体構造を形成していること、(2)Tドメインの立体構造はthrombospondin type-1 repeatとよく一致すること、(3)Sドメインは10本のβストランドからなる2層のアンチパラレルなβシートからなる構造単位であることが明らかになった。決定した立体構造を基にしてアミノ酸変異を導入し、変異ADAMTSI3-MDTCS(Ala75-Ala685)組換え体の活性をFRETS-VWF73を用いて測定した。その結果、D、C、S各ドメイン上に、空間的に隔たりながらも直線状に並んだ、少なくとも3か所のエキソサイトの存在を同定した。以上より、ADAMTS13は、DTCS領域に存在する複数のエキソサイトで、ずり応力等でほどけたVWFを広範囲で認識するし、VWFへの特異的な親和性を高めていると考えられた。

ADAMTS13 regulates the molecular weight of von Willebrand factor (VWF) in plasma and inhibits platelet thrombosis. Loss of ADAMTS13 activity causes platelet thrombosis in small blood vessels and thrombotic thrombocytopenia. We determined the stereostructure of ADAMTS 13-DTCS(Arg287-Ala685) by X-ray crystallographic analysis. The secretion system of CHO-Lec cells in DTCS group was modulated by crystallization. SPring-8 X-ray reflection intensity is determined by the three-dimensional structure. The results are as follows: (1) The identity of the acid arrangement of the three-dimensional structure of the D-type mixture is low, and the same three-dimensional structure is formed.(2) The three-dimensional structure of the T-type mixture is consistent with the thrombospondin type-1 repeat.(3) The structure of the structure unit is composed of two layers, namely, the first layer and the second layer. To determine the basic structure of the protein, we introduced different ADAMTS3-MDTCS(Ala75-Ala685) and determined the activity of FRETS-VWF73. The results of D, C and S are the same as those of D, C and S. ADAMTS13 has a high affinity for VWF and a high affinity for VWF in DTCS domain.

项目成果

Production, crystallization and preliminary crystallographic analysis of an exosite-containing fragment of human von Willebrand factor-cleaving proteinase ADAMTS13

• DOI: 10.1107/s1744309109023410
• 发表时间: 2009-07-01
• 期刊: ACTA CRYSTALLOGRAPHICA SECTION F-STRUCTURAL BIOLOGY COMMUNICATIONS
• 影响因子: 0.9
• 作者: Akiyama, Masashi;Takeda, Soichi;Miyata, Toshiyuki
• 通讯作者: Miyata, Toshiyuki

Integrin-linked kinase associated with integrin activation

• DOI: 10.1182/blood-2008-07-169136
• 发表时间: 2009-05-21
• 期刊: BLOOD
• 影响因子: 20.3
• 作者: Honda, Shigenori;Shirotani-Ikejima, Hiroko;Miyata, Toshiyuki
• 通讯作者: Miyata, Toshiyuki

DAMTS13の部分結晶構造とフォンビルブロンド因子認識・切断機構

DAMTS13的部分晶体结构和von Wille Blond因子识别和裂解机制

• 发表时间: 2009
• 作者: Naito M;et.al.;Akiyama M;Akiyama M;Banno F;Honda S;Akiyama M;武田壮一
• 通讯作者: 武田壮一

Crystal structure of the exosites-containing fragment ofADAMTS13. XXII Congress of The International Society on Thrombosis and Haemostasis.

ADAMTS13 含有外部位点片段的晶体结构。

• 发表时间: 2009
• 作者: Naito M;et.al.;Akiyama M;Akiyama M;Banno F;Honda S;Akiyama M;武田壮一;Masashi Akiyama
• 通讯作者: Masashi Akiyama

ADAMTS13非触媒ドメインの結晶構造解析とvon Willebrand因子に対する複数の非連続エキソサイトの同定

ADAMTS13 非催化结构域的晶体结构分析和冯维勒布兰德因子多个不连续外部位点的鉴定

• 发表时间: 2009
• 作者: Naito M;et.al.;Akiyama M;Akiyama M;Banno F;Honda S;Akiyama M;武田壮一;Masashi Akiyama;Masashi Akiyama;秋山正志
• 通讯作者: 秋山正志