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ハイブリッドミクロスフェアの作製とその認識・分離機能の利用

杂化微球的制备及其识别分离功能的利用

基本信息

批准号：
63604583
负责人：
川口春馬
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-63604583/
关键词：
転写制御タンパク質 DNA ラテックス粒子タンパク質分離特異吸着

项目摘要

標記研究において、本年度は特に、特定の塩基配列を持ったDNA鎖のラテックス粒子への固定、さらにそれを用いた転写制御タンパク質の分離・精製について研究した。ラテックス粒子は、ソープフリー乳化重合により調整した。種々のラテックス粒子のうち、適度の親水性をもちタンパク質の非特異吸着を受けにくい点、および、DNA固定のための原子団を有する点とから、ポリグリシジルメタクリレート粒子が適当であると判定した。DNAは転写制御タンパク質E4TF1またはE4TF3に認識される塩基配列15b.p.程度からなるものを重合し約300b.p.にしたものを用いた。DNAの固定はBrCN法で行ない、固定のための最適条件を検討した。見い出された最適の濃度、PH、温度では、粒子あたり約100本程度のDNA鎖を有するラテックス粒子が得られた。こうして得られたDNA固定ラテックス粒子を用いて、HeLaの細胞の抽出液からE4TF1、E4TH3の分離・精製を行ったところ、コンペティターpoly(dI-dC)を共存させた系で、電気泳動バンド上にほぼ単一バンドとみなせるほどまでに精製できた。なお精製されたタンパク質が転写制御機能を保持していることも確認した。本法は硬質粒子を用いたバッチ法によるアフィニティ分離であり、カラム法と比べ、格段に迅速に、簡便に、かつ効率よく、それぞれの転写制御タンパク質を精製することができた。今後は、粒子への非特異吸着を防ぐための対策、DNaseによるラテックス粒子上のDNA鎖の切断の防止などについて研究を続ける。また、DNA鎖以外に、レクチンやオリゴ糖固定粒子の作製、その機能についての研究も行う。研究に協力頂いた東大医半田宏博士に感謝致します。

This year, we will continue our research on the immobilization and purification of DNA molecules based on specific DNA sequences. The particle size is adjusted according to the emulsion size. The species has a proper hydrophilic property, and the non-specific adsorption of the species has a proper hydrophilic property. The DNA sequence of E4TF1 and E4TF3 was determined by DNA sequencing. The optimal conditions for DNA immobilization were discussed. The optimum concentration, pH, temperature and particle size are determined by DNA sequencing. DNA immobilization and purification of E4TF1 and E4TH3 in HeLa cell extracts were carried out in the presence of DNA immobilized particles and in the presence of DNA immobilized poly(dI-dC). Refine the quality and control function. The method for hard particles is simple, rapid, efficient, and precise. In the future, the research on the prevention of non-specific adsorption of particles and the prevention of DNA lock on particles will be carried out. DNA lock, DNA lock Thank you for your cooperation with Dr. Hiroshi Handa.