変異蛋白質の安定性の定量的評価

突变蛋白稳定性的定量评估

• 批准号: 63616509
• 负责人: 油谷 克英
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1988
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1988 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-63616509/
• 关键词: カロリメトリー; トリプトファン合成酵素α-サブユニット; アミノ酸置換; 蛋白質の立体構造の安定性; 安定性の定量

遺伝子組み替え技術の普及によって、生化学的素養があれば誰にでも蛋白質のアミノ酸を置換することが出来るようになってきた。しかし、蛋白質の構造と安定性との相関関係に関する知見がほとんどないため、どの位置でどの残基に置換すれば、安定性を高められるかなど、予測できない。本研究の目的は系統的に置換した置換蛋白質の安定性を精度高く評価し、置換残基の特性と安定性との関係を明らかにすることである。私たちは、大腸菌のトリプトファン合成酵素α-サブユニットの系統的な一残基置換体を用いて、置換残基が構造(形成)、機能、安定性にどんな影響を及ぼすかを調べてきた。その中で、49位(分子内部)の一連の置換体を用いて、その蛋白質の安定性を塩酸グアニジン変性曲線の解析から変性のギブスエネルギー(△dG)を求め、変異型の△dGは49位残基の疎水性に比例することを明らかにした。そこで、今年度は、1)塩酸グアニジン曲線変性の解析から得た△dGはいくつかの仮定を含むので、直接法であるカロリメトリーで49位変性型の△dGを検証した。プリバーロフ型示差走査断熱ミクロカロリメーター(DASM4)を用いて測定した結果、49位の各々の変異型α-サブユニットのカロリメーターから得られた変性のギブスエネルギー変化は塩酸グアニジン変性曲線(濃度0に外挿)から得られたものとよい一致を示した。2)α-サブユニットの6個の保存Pro残基(10種のバクテリアで保存されている)をそれぞれAlaに置換した6種の変異型(28,57,62,96,132,又は207位で置換)を部位指定突然変異法で得た。それらをカロリメーター(DASM4)を用いて熱安定性を定量したところ、いずれも野生型よりも安定性(△dG)が低下していた。この安定性の低下はおもにエントロピー効果によることが判明した。このことは変性状態のエントロピーを増大させたと説明できる。

The sub-organization is responsible for the popularization of technology and biochemistry. Protein, protein, acid, acid, amino acid, acid, acid, It is necessary to determine the stability, the position, the residue, the stability, the position, the stability, the position, the stability, the stability. The purpose of this study is to determine the stability of the system, the stability of the protein, the stability of the protein, the stability of the residue, the stability of the residue, the stability of the protein and the stability of the residue. The biosynthetic enzyme α-β-lactamase of the biosynthetic enzyme α-mycelium system is used, the residue is made (formed), the mechanism, the stability is affected, and the enzyme is affected. In this study, 49 (intramolecular), 49 (intramolecular) molecules were used to determine the stability of the body, the stability of the body, the stability of the protein, the stability of the body, the stability of the body, the stability of the protein, the stability of the body, the stability of the protein, the stability of the body, the stability of the body, the stability of the protein, the stability of the body, the stability of the protein, the stability of the body, the stability of the body, the stability of the protein, the stability of the body, the stability of the protein, the stability of the body, the stability of the body, This year's report, 1) the result of dG analysis is that there is a direct method to determine the content of the drug, and the direct method is to determine the 49-bit sex type of dG. The results of the test were determined by DASM4. The results of the test were consistent with each other. The results of the test were consistent with each other. The results of the test were consistent with each other. 2) the Pro residues were preserved in 6 fragments of the alpha-amino acid sequence (10 different sequences), and the 6 sequences of the alpha-amino acid sequence were selected by the sudden mutation method. The 6 types of the alpha-amino acid sequence were selected by the sudden mutation method (28 mine5, 57, 62, 62, 132, and 207th). The wild type was used to quantify the stability (dG) of the wild type. The stability (dG) was low. The stability is low, and the stability is low. I don't know what to do. I don't know what to do.

项目成果

Miles,E.W.;et al.: J.Biol.Chem.263. 8611-8614 (1988)

Miles，E.W.；等人：J.Biol.Chem.263。

油谷克英: 細胞工学. 7. 565-571 (1988)

胜秀裕也：细胞工程。7. 565-571 (1988)

Matsumura,M.;et al.: Eur.J.Biochem.171. 715-720 (1988)

Matsumura，M.；等人：Eur.J.Biochem.171。

Kato,A.;et al.: Protein Engineering. 2. 153-156 (1988)

Kato,A.；等人：蛋白质工程。