权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

fushi-tarazu遺伝子の調節領域に結合するタンパク因子の解析

与 fushi-tarazu 基因调控区结合的蛋白质因子分析

基本信息

批准号：
63639509
负责人：
広瀬進
金额：
$ 1.92万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ショウジョウバエのfushi-tarazu遺伝子の調節領域内にある特定の部位に塩基特異的に結合する因子NFftz1について以下の研究を行った。1.ショウジョウバエ初期胚においてNFftz1がはたす機能を明らかにするため、fushi-tarazu遺伝子の上流にあるNFftz1結合部位のうち中央の2もしくは4塩基を置換した変異型遺伝子を作製し、lacZ遺伝子と結合した。Pエレメントを用いてこの変異型遺伝子または野生型遺伝子をショウジョウバエに導入し、初期胚での発現パターンをβガラクトシダーゼの活性染色により調べた。その結果、野生型では7つのストライプ状に発現するのに対し、変異型遺伝子では3つのストライプはほぼ正常だが、残りの4つのストライプはほとんど発現されなかった。この結果は、NFftz1がfushi-tarazu遺伝子の空間的発現を制御していることを示唆する。2.NFftz1に相当する因子がカイコにも存在するか否かについて、結合部位を含む合成オリゴヌクレオチドをプローブにしてゲルシフト法で解析した。その結果、カイコ受精卵核抽出液および、後部絹糸腺抽出液中に結合活性を見出した。競合DNAによるゲルシフトの阻害、DNAメチル化の干渉、プロテアーゼによる部分分解、各種クロマトグラフィーでの挙動などから、ショウジョウバエとカイコの因子は極めて相同性が高いと推定された。そこで、後部絹糸腺抽出液から結合部位DNAアフィニティーカラムなどを用いてこの因子を精製し、50%以上の純度をもつ標品を得た。今後、SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動によりこの標品をさらに精製し、N末のアミノ酸列を決定してこの因子のcDNAをクローニングする予定である。

The following studies have been conducted on specific sites in the regulatory domain of fushi-tarazu genes and on the binding factor NFtz1: 1. NFTZ 1 is a functional group that is composed of two or more groups of genes, namely, NFTZ 1, NFTZ 1, NFTZ 2, NFTZ 3, NFTZ 4, NFTZ 4, NFTZ 3, NFTZ 4, NFTZ 4, NFTZ 3, NFZ 4, NFZ, N The wild type gene is introduced into the embryo and the early embryo is developed into the active dye. The results, wild-type 7, heteromorphic 3, heteromorphic 3, heteromorphic 4, heteromorphic 3, heteromorphic 3, heteromorphic 4, heteromorphic 3, heteromorphic 4, heteromorphic 4, heteromor As a result, NFtz 1 and fushi-tarazu gene space are controlled. 2. NFftz1 is the equivalent factor for the analysis of binding sites. The binding activity was observed in the extract of fertilized egg nucleus and the extract of posterior sericoid gland. Co-existence of DNA, DNA DNA binding site of the extract from the posterior serous gland is purified by the factor, and the purity is more than 50%. In the future, SDS can be used to purify and determine the cDNA sequence of this factor.