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スーパーコイル形成による転写制御機構

超螺旋形成的转录控制机制

基本信息

批准号：
62620514
负责人：
広瀬進
金额：
$ 1.47万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

われわれは, カイコ絹糸腺抽出液中にDNAをスーパーコイル化するジャイレース様活性を検出し, 鋳型DNAのスーパーコイル形成による転写の活性化を見いだしてきた. このスーパーコイル形成による転写活性化の機構を調べる目的で, フィブロイン遺伝子の転写を1.0.025%Sarkosylで阻止される転写開始複合体形成, 2.0.05%Sarkosylで阻止される開始複合体から伸長複合体への変換, 3.0.05%Sarkosylに抵抗性なその後RNA鎖伸長反応の3過程に分けて解析した. その結果, 伸長複合体への変換(素過程2)とその後のRNA鎖伸長反応(素過程3)は速やかな反応で, 鋳型DNAのスーパーコイル形成によって影響う受けないのに対し, 開始複合体形成(素過程1)は転写の律速段階であり, DNAのスーパーコイル形成により著しく促進されることが判明した. DNAをスーパーコイル化するジャイレース様活性は, DNAトポイソメラーゼIIとスーパーコイル化因子から成っているため, トポイソメラーゼIIの特異的阻害剤であるVP16によって阻害される. そこでVP16が転写に及ぼす効果を調べたところ, スーパーコイル形成の阻害にともなって閉環状DNA上での開始複合体形成が抑えられるが, 素過程2と3には影響がみられなかった. 以上の結果から, 鋳型DNAのスーパーコイル形成によって開始複合体形成が促進され, 転写が活性化されるという機構が明らかとなった. 今後は, 開始複合体形成にあずかる転写因子(TFIIA.TFIIB.TFIID.TFIIE)とRNAポリメラーゼIIを分画し, これらのうちどの因子がスーパーコイル化したDNAに高い親和性をもっているかについて調べる予定である.

The activity of DNA in the extract from the serous gland was detected, and the activity of DNA in the formation of serous gland was detected. To achieve this goal, 1.0.025% Sarkosyl prevented the formation of the initiation complex, 2.0.05% Sarkosyl prevented the transition from the initiation complex to the elongation complex, and 3.0.05% Sarkosyl prevented the resistance to RNA lock elongation. As a result, it was found that the transformation of the elongation complex (process 2) and the subsequent RNA lock elongation (process 3) was reversed, and the formation of the DNA complex was initiated (process 1). DNA is a unique inhibitor of DNA synthesis, DNA synthesis, and VP16 synthesis. VP16 is the first step in the process of DNA synthesis. As a result, the formation of DNA complex was promoted, and the activation mechanism of DNA complex was promoted. In the future, complex formation will begin when the factors (TFIIA.TFIIB.TFIID.TFIIE) and RNA molecules are divided into two groups.