好中球の貧食におけるリピッドラフトの役割の解明

阐明脂筏在中性粒细胞吞噬不足中的作用

• 批准号: 15019098
• 负责人: 岩渕 和久
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15019098/
• 关键词: 好中球; ラクトシルセラミド; グリコシグナリングドメイン; 貪食; 非定型抗酸菌; 食胞形成; マイクロドメイン; スフィンゴ糖脂質

好中球の貪食過程は、結核菌やMycobacterium Avium Complex (MAC)などの病原性抗酸菌と他の菌とでは異なっているが、その詳細は不明である。病原性抗酸菌は好中球に貪食されても、食胞にリソソームが融合しないためにファゴリソソームが形成されず、菌が生き延びてしまう。この回避機構には、好中球やマクロファージの細胞膜上のリピッドラフトに含まれる脂質と抗酸菌の膜成分が重要な役割を果たしていることが示されている。本研究は、非結核性抗酸菌を好中球が貪食する過程で、LacCerがどのように関与しているかについて共焦点レーザー顕微鏡を用いてリアルタイム観察するとともに、MACのLacCerに対する結合分子を同定することで、食細胞形成過程におけるLacCerを含むリピッドラフトの役割を明らかにすることを目的としている。我々はBODIPY-LacCerを用いて、貪食過程をリアルタイムに解析することを試みた。好中球がMACを貪食すると、MACにBODIPY-LacCerが集中した。あらかじめ好中球の酸性リソソームをLysoTrackerを取り込ませた好中球のファゴリソソーム形成過程をリアルタイムに観察したところ、ザイモサンを貪食した好中球では、リソソームがBODIPY-LacCerで標識された食胞に融合した。しかしながら、好中球がMACを貪食してもBODIPY-LacCerで標識された食胞にLysoTrackerは融合しなかった。これらの結果は、細胞膜上のLacCerのリピッドラフトであるグリコシグナルドメインが菌の認識・貪食過程に関与する可能性を示唆している。特に、貪食されたMACにLacCerが集積する一方で、リソソームの融合が観察されなかったことから、リソソームの融合阻害にLacCerが関与している可能性が考えられる。また、MACのLacCerに対する結合分子の同定を目指し、MACから抽出した脂質成分で作ったリポソームをスフィンゴ脂質に結合させることで、LacCerを認識するMAC由来脂質の分離精製を試みた。その結果、リポアラビノマンナンを含むMAC由来の脂質からなるリポソームがLacCerに特異的に結合することを見いだした。

The gluttony process in the good sphere is different from that in the pathogenic acid-resistant bacteria of Mycobacterium Avium Complex (MAC). Pathogenic acid-resistant bacteria are good at gluttony, food cells, soft tissue fusion, soft tissue formation, and growth. The avoidance mechanism is very important for cell membranes containing lipids and acid-resistant bacteria. This study focuses on the identification of non-tuberculous acid-fast bacteria, LacCer, and LacCer binding molecules using microscopes. We try to analyze the process of gluttony by using BODIPY-LacCer. Good in the ball MAC gluttony, MAC BODIPY-LacCer concentration LysoTracker is used to detect the acidity and softness of a good ball. LysoTracker is used to detect the acidity and softness of a good ball. LysoTracker is used to detect the acidity and softness of a good ball. BODIPY-LacCer is a symbol of gluttony and LysoTracker is a fusion of gluttony. These results indicate the possibility that LacCer on cell membranes may be involved in the recognition of bacteria and the process of gluttony. Special, gluttonous MAC LacCer accumulation, detection of fusion, detection of fusion, detection of fusion resistance, LacCer correlation and detection of possibility. The identification of MAC and LacCer binding molecules and the purification of MAC derived lipids The results are as follows:

项目成果

Hamaguchi A, et al.: "A sphingosine-dependent protein kinase that specifically phosphorylates 14-3-3 (SDK1) is identified as the kinase domain of PKCdelta : a preliminary note."Biochem Biophys Res Commun.. 307. 589-594 (2003)

Hamaguchi A 等人：“一种特异性磷酸化 14-3-3 (SDK1) 的鞘氨醇依赖性蛋白激酶被确定为 PKCdelta 的激酶结构域：初步说明。”Biochem Biophys Res Commun.. 307. 589-594

Akihiko Ohwada, et al.: "Acid exposure potentiates ICAM-1 and E-cadherin expression on A549 alveolar lining epithelial cells."Experimental Lung Research. 100. 389-400 (2003)

Akihiko Ohwada 等人：“酸暴露增强 A549 肺泡衬里上皮细胞上 ICAM-1 和 E-钙粘蛋白的表达。”实验肺研究。

Akihiko Ohwada, et al.: "VEGF regulates the proliferation of acid-exposed alveolar lining epithelial cells."Thorax. 58. 328-332 (2003)

Akihiko Ohwada 等人：“VEGF 调节暴露于酸的肺泡衬里上皮细胞的增殖。” 胸部。

Hamaguchi A, et al.: "Sphingosine-dependent protein kinase-1 (SDK-1) is identified as the kinase domain of PKC"J.Biol.Chem.. 278. 41557-41565 (2003)

Hamaguchi A 等人：“鞘氨醇依赖性蛋白激酶-1 (SDK-1) 被鉴定为 PKC 的激酶结构域”J.Biol.Chem.. 278. 41557-41565 (2003)