HIV TatによるNotchシグナルを介した遺伝子発現、細胞増殖調節機構の解析

HIV TatNotch信号介导的基因表达及细胞生长调控机制分析

• 批准号: 15019106
• 负责人: 草野 秀一
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: St. Marianna University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15019106/
• 关键词: ウイルス; 発現制御; 感染症; タンパク質; 遺伝子

本研究は、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)Tatタンパク質がNotchタンパク質との相互作用を介して、細胞増殖・分化などに重要な役割を担うNotchシグナルにどのような影響をおよぼすのかを明らかにし、HIVの病因学の発展に貢献することを目標として遂行した。初めに、上皮細胞を用いて、TatとNotchとの相互作用を解析した。免疫沈降実験の結果、Tatは、Notch1、Notgh4と特異的に相互作用した。この相互作用には、Tatの1〜12番目のプロリンに富んだアミノ酸領域およびNotchの細胞外領域が必要であった。次に、この相互作用が、Notchシグナルにおよぼす影響を解析した。Notch結合タンパク質であるRBP-J_K結合配列を用いたレポーターアッセイにより、Tatは、RBP-J_K依存的な転写を抑制した。免疫沈降実験の結果、この作用は、TatがNotchとRBP-J_Kの相互作用を弱めるためであった。また、Tatは、Notchのプロテアソーム依存的な分解を促進すること、そして、これはNotchのユビキチン化が促されるためによって起こることが示された。Notchは、T細胞におけるCD4+/CD8+T細胞からのCD4-/CD8+T細胞への選択に機能することが知られている。Tatが、T細胞においても上皮細胞と同様にNotchシグナルを抑制するのであれば、CD4+T細胞に感染するHIVには非常に有利なものであると考えられた。今後は、可能な限り速やかにT細胞を用いた解析を完了させたいと思う。しかし、T細胞株は、上皮細胞株に比べて遺伝子の導入効率が低いため、現在、レトロウイルスベクター系を用いてTatを恒常的に発現するJurkat細胞株を構築しており、構築後は速やかに、T細胞においても同様の現象が見られるかどうかを検証する予定である。

This study aims to clarify the role of HIV in the development of HIV etiology by mediating the interaction of HIV Tat protein and Notch protein, and by contributing to the development of HIV etiology through cell proliferation and differentiation. Analysis of the interaction between primary and epithelial cells Immunoprecipitation results, Tat, Notch1, Notch 4 and specific interactions The interaction between Tat 1 and Tat 12 is necessary for the extracellular domain. Second, the interaction between the two, Notch and the impact of the analysis Notch binding is essential for RBP-J_K binding and alignment. Tat binding is essential for RBP-J_K binding. As a result of immune sedimentation, the interaction between Tat Notch and RBP-J_K is weak. Tat, Notch, Notch. Notch T cell selection and function of CD4 +/CD8 + T cells Tat, T cells and Notch cells are very beneficial to HIV infection. In the future, it is possible to limit the use of T cells. Jurkat cell lines are constructed at a lower rate of gene introduction than epithelial cell lines, and the same phenomenon is observed in T cell lines after construction.

项目成果

草野秀一: "「BARTs、BARF1」、EBウイルス(高田賢藏 監修)"診断と治療社. 11 (2003)

Shuichi Kusano：“‘BARTs，BARF1’，EB 病毒（高田贤三监督）”诊断和 Herosha 11 (2003)。