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マウス生殖細胞の高次生物機能を具現するRNA情報発現ネットワークの研究

实现小鼠生殖细胞更高生物学功能的RNA信息表达网络研究

基本信息

批准号：
15030215
负责人：
栗原靖之
金额：
$ 4.1万
依托单位：
Yokohama National University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15030215/
关键词：
マウス生殖細胞 RNA結合タンパク質精子形成翻訳制御 mRNA運搬

项目摘要

マウス精子分化の過程で高発現するRNA結合タンパク質mPrrpの生殖細胞における機能解明を目指し、本課題ではmPrrpが結合し制御するmRNAと相互作用するタンパク質の同定を行った。抗mPrrpモノクローナル抗体で精巣抽出物から免疫沈降を行い、得られたmRNAを逆転写しプラスミドベクターにクローン化した。このようにして得られた100クローンのDNA配列を決定したところ、精子の尾部の運動を司るモータータンパク質のmRNAやその運動エネルギーとなるATP産生系のタンパク質をコードするmRNAを得ることができた。このmRNAは抗mPrrp抗体による免疫沈降物に特異的に見られたことと、それらのmRNAとタンパク質の発現時期やmPrrpタンパク質の細胞内局在や機能する時期が一致することから、これらのmRNAはmPrrpによって制御されることが強く示唆された。さらに、mPrrpがこれらmRNAをどのように制御するかを明らかにするためmPrrpと相互作用するタンパク質の同定を行った。抗mPrrp抗体で免疫沈降し、共沈してきたタンパク質を質量分析法で同定したところ、PABP1,MSY2,Upf1,CBP80タンパク質などが共沈してきた。翻訳抑制されたmRNAに結合するY-boxタンパク質MSY2が共沈してきたことはmPrrpが制御するmRNAが翻訳制御されていることを示しており、mPrrpの機能を明らかにするための手がかりを得ることができた。今年度の結果をまとめると、mPrrpは精子の運動性を担うタンパク質をコードするmRNAの翻訳を制御し、精子形成の最終段階で適正に翻訳が行うことに関与しているらしいことが分かった。

The high expression of RNA binding protein in the process of sperm differentiation and the functional elucidation of mPrrp in germ cells indicate that mPrrp binding protein and mRNA interaction in sperm differentiation are essential. Anti-mPrp anti-mPrp anti-mPrp The DNA sequence of the sperm is determined by the mRNA sequence of the sperm tail, and the ATP production system is determined by the mRNA sequence of the sperm tail This mRNA is specific for anti-mPrp antibodies and immune deposits. The mRNA is expressed at the same time as the mRNA. mPrp interaction with mRNA Anti-mPrrp antibodies were identified by mass spectrometry (MS), PABP1, MSY2, Upf1, CBP80, and co-precipitated by immunoprecipitation. Y-box mRNA binding to mPrrp mRNA binding to mPrrp This year's results show that mPrrp is responsible for sperm motility, quality, mRNA regulation, and the final stage of sperm formation.