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マウス生殖細胞の高次生物機能を具現するRNA情報発現ネットワークの研究

实现小鼠生殖细胞更高生物学功能的RNA信息表达网络研究

基本信息

批准号：
14035220
负责人：
栗原靖之
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Yokohama National University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14035220/
关键词：
RNA 生殖細胞マウス翻訳調節

项目摘要

当研究室で得られた雄性生殖細胞に高発現する2つの新規RNA結合タンパク質の機能を探る研究を行った。Mrp1精巣中での発現細胞特異性を今回樹立したモノクローナル抗体を使って検討したところ、減数分裂後の生殖細胞にのみ発現し、round spermatidでは核に局在していたが、elongate spermatidになると細胞質へ移行していた。さらにelongate spermatidでの細胞質内では精子の尾部形成部位に斑点状に分布していた。また、Mrp1とアクチン結合タンパク質との相互作用を検討したところ、特異的相互作用が見られた。さらに、Mrp1の特異的結合配列をin vitro SELEX法で調べたところ、GU_<2-3>AGに配列特異的に結合した。この配列はアクチンダイナミクスに関連するmRNA中に存在していることがデータベース検索でわかった。これら一連の実験から、Mrp1は精子形成の最終期、spermiogenesisの形態形成に関わるアクチンに結合し、アクチン代謝に関連するmRNAを係留する機能を持つことが推定される。CPEB2CPEB2が減数分裂後の雄性生殖細胞の細胞質に特異的に発現しpoly(U)に特異的に結合した。また、既知の配列のさらに上流に未同定の領域があることがわかり、全長をクローン化して配列を決定する事が出来た。また、CPEBファミリーの新しい遺伝子CPEB3を同定した。可溶化したCPEB3のRNA結合ドメイン部分を大腸菌で発現させることが出来たので、in vitro SELEX法で特異的結合するRNAオリゴマー(50-mer)を得た。この配列中から特異的に結合するRNA領域を抽出しているところである。CPEB3とCPEB2はRNA結合領域で96%以上のアミノ酸配列の相同性を示すので、これら二つのタンパク質は共通のRNA結合配列を持つと予想している。

When the laboratory was able to detect the high level of male germ cells, 2 new RNA binding proteins were studied. Mrp1 sperm is found in the development of cell-specific antibodies, such as cell development, round spermatid and cytoplasmic migration in postmeiotic germ cells. In the cytoplasm of the sperm, there are spots on the tail formation site of sperm. Mrp1, Mrp2, Mrp3, Mrp4, Mrp5, Mrp6, Mrp7, Mrp8, Mrp9, Mrp9, Mrp9, Mrp1 specific binding in vitro SELEX method, GU_<2-3>AG This sequence is present in the mRNA associated with this gene. Mrp1 is presumed to function as an mRNA tethered to terminal stages of spermatogenesis, morphogenesis, and metabolism. CPEB 2 CPEB 2 is a cytoplasmic, specific, and binding event in postmeiotic male germ cells. It is known that the arrangement of the upper reaches of the river is not determined by the length of the river. CPEB3 is a new generation of CPEB. Soluble CPEB3 RNA binding site was identified in E. coli by vitro SELEX method. The RNA domain was extracted from the DNA sequence. CPEB3 and CPEB2 share more than 96% of the RNA binding domain and share the same RNA binding domain.